[发明专利]一种针对赭曲霉毒素A的灵敏检测方法

摘要

本发明提供了一种针对赭曲霉毒素A的灵敏检测方法，该方法利用包埋有量子点的荧光微球替代常规的酶载体与赭曲霉毒素A偶联，以偶联产物作为竞争抗原执行直接竞争ELISA。在技术路线中，本发明首先依据发光特性选择了适宜的量子点，进一步设计了基于荧光微球技术的量子点包埋方法，在此基础上，将量子点荧光微球经BSA包被后与赭曲霉毒素A偶联，从而得到了性能更好的竞争性抗原。该技术方案中，荧光微球通过高聚物载体包埋了大量的量子点，因而具有更高的发光强度，可有效地提高检测的灵敏度；而且，由于荧光微球具有较大的粒径，因此可在一定程度上降低竞争抗原与包被抗体之间过高的亲和力，从而提升检测的灵敏度。

主权项

1.一种针对赭曲霉毒素A的灵敏检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)在酶标板上包被抗体；2)以氯仿为溶剂，配制油酸基团修饰的量子点浓度为15～25mg/mL、PMMA浓度为25～35mg/mL、PMAO浓度为15～25mg/mL的混合溶液，保持25～35min，而后将取十二烷基磺酸钠水溶液与所述混合溶液混合至其中油酸基团修饰的量子点浓度为3～4mg/mL，混合均匀后去除氯仿，固液分离取固相，即得到标记有羧基修饰的量子点的荧光微球；3)利用牛血清白蛋白包被标记有羧基修饰的量子点的荧光微球，将包被产物与赭曲霉毒素A偶联，即得到竞争抗原；4)将待测溶液与所述竞争抗原加入至步骤1)包被有抗体的酶标板中，抗原抗体结合反应，而后检测酶标板的荧光强度；步骤3)中，所述利用牛血清白蛋白包被标记有羧基修饰的量子点的荧光微球，包括以下步骤：在磷酸盐缓冲液中将标记有羧基修饰的量子点的荧光微球与1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、牛血清白蛋白混合，至溶液中牛血清白蛋白的质量体积分数为0.8％～1.2％，于35～39℃反应25～35min，而后补加1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺3～5次，每次补加后于35～39℃反应25～35min，补加全部完成后固液分离取固相，洗涤后溶解于碳酸氢钠溶液中；步骤3)中，所述偶联包括以下步骤：在无水四氢呋喃环境下，取二环己基碳二亚胺、N‑羟基琥珀酰亚胺、赭曲霉毒素A混合活化；收集活化后的赭曲霉毒素A，按照活化后的赭曲霉毒素A与所述包被产物上牛血清白蛋白二者摩尔比为1:8～1:12将赭曲霉毒素A与所述包被产物混合，在pH为8.4～8.8、室温条件下反应10～14h，收集产物，洗涤后溶解于水中。