[发明专利]一种树木茎干组织的石蜡切片方法

摘要

本发明公开了一种树木茎干组织的石蜡切片方法，属于植物显微组织切片技术领域。该包括组织固定、一次软化、脱水、透明、浸蜡、包埋、二次软化、切片、展片、粘片、烤片、脱蜡、复水、染色和封片等操作，其中增加软化处理能够解决茎干组织中韧皮部、形成层和木质部三者因硬度不一致而导致切片过程中组织易碎等问题。软化处理包括两步操作，一是在组织固定后，增加用乙醇/甘油混合液软化组织的操作，二是在包埋粗切削后，增加用温水浸泡的操作，以软化待切组织。试验证明，软化组织可以降低切片中茎干组织易碎的机率，提高切片成功率。

主权项

1.一种树木茎干组织的石蜡切片方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）组织固定：将树木茎干组织浸于固定液中固定；步骤（1）中茎干组织取自树木胸径处，组织大小为直径1.5~2.5mm，长度15~20mm；所述茎干组织包含韧皮部、形成层和3～5年的木质部区域；（2）一次软化：将固定后的组织浸于体积比1:1的70%乙醇与甘油的软化液中软化；步骤（2）中软化的时间为1~4周；（3）组织脱水：具体操作为：1）在35%乙醇中保持1h；2）在70%乙醇中保持1h；3）在90%乙醇中保持50min；4）重复步骤3）中操作1次；5）在95%乙醇中保持50min；6）在100%乙醇中保持40min；7）重复步骤6）中操作1次；（4）组织透明：具体操作为：1）在体积比1:1的100%乙醇与二甲苯的混合液中保持40min；2）在二甲苯中保持40min；3）重复步骤2）中操作1次；（5）浸蜡和包埋：将透明后的组织浸于液体石蜡中浸蜡，浸蜡后包埋；（6）二次软化：将包埋后的组织浸于30℃的水中半小时至一周软化；（7）切片、展片、粘片和烤片；（8）脱蜡和复水：切片组织用二甲苯脱蜡处理后，再依次用浓度梯度为100%、95%、70%的乙醇和水复水；复水的具体操作为：1）在100%乙醇中保持20s；2）在95%乙醇中保持20s；3）在70%乙醇中保持20s；4）在蒸馏水中保持20s；（9）染色和封片：采用番红‑固绿染色法染色，封片即可；染色的具体操作为：1）在1%番红水溶液中保持15~20min；2）在蒸馏水中保持10s；3）在70%乙醇中保持10s；4）重复步骤3）中操作3次；5）在0.5%固绿的95%乙醇溶液中保持30s；6）在95%乙醇中保持10s；7）重复步骤6）中操作1次；8）在无水乙醇中保持10s；9）重复步骤8）中操作1次。