[发明专利]一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法

摘要

本发明公开了一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法，步骤为：1）建立鲈鱼精子冷冻库；2）精子遗传物质灭活；3）星斑川鲽未受精卵的采集及授精；4）受精卵压力休克诱导；5）雌核发育卵的培养。本发明的方法，有利于提高星斑川鲽雌核发育的受精率和发育率，建立了星斑川鲽雌核发育群体。

主权项

1.一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法，其特征在于，步骤为：1）建立鲈鱼精子冷冻库：在鲈鱼性成熟期，选择发育至可产精液的雄性鲈鱼，采集精液，对活力达到80%以上的精子进行冷冻保存，建立精子冷冻库；对精子进行冷冻保存的方法为，将精液与冷冻保存液以体积比1:1的比例混合，分装到冷冻保存管中，然后放入‑196℃的液氮中冷冻保存；所述冷冻保存液的组成为80%的精子稀释液和20%的二甲基亚砜，为体积比；所述精子稀释液的组成为NaCl 3.526g/L，NaH₂PO₄ 0.281g/L，NaHCO₃ 0.252g/L，KCl 0.389g/L，D‑Glucose 10.0g/L；2）精子遗传物质灭活：将冷冻精子从液氮中取出并解冻；对精子进行紫外线灭活处理，使精子遗传物质失活，精子的活力保持在30‑40%；3）星斑川鲽未受精卵的采集及授精：选择性成熟的星斑川鲽雌鱼，每天5:00、17:00采卵，将上述灭活的鲈鱼精液加入星斑川鲽卵中，轻轻摇动混匀，精液和卵的受精最小体积比为100µL：4mL，加入2倍体积于卵量的海水受精，海水温度为13‑14℃；4）受精卵压力休克诱导：在受精后5min，将受精卵注入压力容器中，快速将压力提升至60MPa，压力提升时间为8‑10s，静水压持续时间10min，之后缓慢释放压力；5）雌核发育卵的培养：将上述经过压力休克后的星斑川鲽受精卵利用海水清洗、沉淀过滤、除去沉淀死卵，将上浮受精卵加入13‑14℃的海水，放在网箱中孵化培养。