[发明专利]血清中25-羟基维生素D的检测方法

摘要

本发明涉及一种血清中25‑羟基维生素D的检测方法。该方法包括如下步骤：样品前处理：在血清样品中加入含有25‑羟基维生素D内标物的乙腈溶液进行蛋白沉淀，离心，取上清液用乙腈稀释，即得待测样品；所述血清样品与所述乙腈溶液的体积比为1：1‑4；所述上清液与所述乙腈的体积比为1：1‑4倍；富集、分离和检测：对所述待测样品采用二维液相色谱串联四级杆质谱联用仪进行富集、分离和检测。该方法前处理简单、大大缩短了检测时间，提高了样本的检测通量，检测精度高，成本低廉、特异性、抗基质干扰能力强。

主权项

1.一种血清中25‑羟基维生素D的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：样品前处理：在血清样品中加入含有25‑羟基维生素D内标物的乙腈溶液进行蛋白沉淀，离心，取上清液用乙腈稀释，即得待测样品；所述血清样品与所述乙腈溶液的体积比为1：1‑4；所述上清液与所述乙腈的体积比为1：1‑4倍；富集、分离和检测：对所述待测样品采用二维液相色谱串联四级杆质谱联用仪进行富集、分离和检测；所述富集、分离和检测的步骤包括：先用流动相1洗脱富集柱中的待测样品，对待测样品进行富集、纯化，再将富集柱与分析柱连通，用流动相2将待测物依次从富集柱洗脱至分析柱，再断开富集柱与分析柱，用流动相2将待测物从分析柱洗脱、分离至四级杆质谱进行检测；其中，富集柱为C6‑Phenyl，4×2.0mm，分析柱为C18，100×2.0mm，3μm；流动相1：A相为甲醇，B相为水，流速为1.0‑2.0mL/min；流动相2：C相为含0.09‑0.11％甲酸的甲醇，D相为含0.09‑0.11％甲酸的水，流速为0.2‑1.0mL/min；流动相采用梯度洗脱的模式：0分时，流动相1中A相与B相的体积比为50:50，流动相2中C相与D相的体积比为70:30，用流动相1洗脱富集柱中的待测样品，对待测样品进行富集、纯化；0.25min后将富集柱与分析柱连通，用流动相2将待测物依次从富集柱洗脱至分析柱，1.5min时流动相2中C相与D相的体积比为85:15；1.9min时断开富集柱与分析柱，用流动相1将富集柱中的残留杂质梯度洗脱至废液瓶中，用流动相2将待测物从分析柱洗脱、分离至四级杆质谱进行检测，5.5min时流动相2中C相与D相的体积比为90:10，5.6min时流动相2中C相与D相的体积比为95:5，6.6min时流动相2中C相与D相的体积比为70:30；整个梯度时间为7.0‑9.0min。