[发明专利]一种通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法

摘要

本发明公开了一种通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，具体操作步骤如下1)培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分；2)愈伤组织的诱导；3)愈伤组织的增殖；4)愈伤组织的共培养；5)不定芽的诱导；6)斑锦不定芽的增殖；7)壮苗及移栽。利用植物离体培养技术对正常和锦化卧牛植株的叶片进行了愈伤组织诱导、共培养及不定芽的再生诱导并成功获得斑锦卧牛植株。本发明方法合成效率较高，可操作性强，可以在较短时间内获得大量斑锦卧牛植株，而且能够广泛应用于斑锦多肉植物的人工合成。

主权项

一种通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1)培养基的配制：(1)基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂6～9g/L，pH＝5.8；(2)诱导培养基：MS+6‑BA 2～6mg/L+NAA 0～0.5mg/L；(3)分化培养基：MS+6‑BA0～0.05mg/L；(4)增殖培养基：MS+6‑BA 0.1～0.3mg/L；(5)壮苗培养基：MS+NAA 0.05～0.2mg/L；2)愈伤组织的诱导：选取正常绿色和完全锦化的卧牛无菌苗的叶片为外植体，将其分别切伤后接种到诱导培养基上进行暗培养诱导愈伤组织；3)愈伤组织的增殖：将步骤2)中诱导的愈伤组织转接至新鲜的诱导培养基上并在有光条件下进行增殖；4)愈伤组织的共培养：将步骤3)增殖获得的正常谱系和锦化谱系的愈伤组织在无菌条件下分别切成碎块后混合接种至诱导培养基上进行共培养；5)不定芽的诱导：挑取步骤4)共培养获得的呈黄绿色相间或相连的嵌合愈伤块置于分化培养基上进行不定芽的诱导培养；6)斑锦不定芽的增殖：将步骤5)中分化出的斑锦类型再生不定芽转接至增殖培养基上进行丛生芽的增殖培养；7)壮苗及移栽：将步骤6)中增殖的斑锦不定芽分割成单株后转接至壮苗培养基上进行壮苗。