[发明专利]一种检测细胞衰老的方法在审
| 申请号： | 201611019873.2 | 申请日： | 2016-11-21 |
| 公开（公告）号： | CN108085361A | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | 黄新河 | 申请（专利权）人： | 成都汉凰生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/06 | 分类号： | C12Q1/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 610000 四川省成都市高新区*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测细胞衰老的方法，将染料食品红104(英文名Phloxin B，CAS：18472‑87‑2)结合到待检测细胞中，形成细胞‑‑染料复合物，加以检测。包括以下步骤：a)染料储液制备：将Phloxin B配制成1mg/ml的储液；b)细胞培养：将裂殖酵母菌株活化接种于YES平板，培养2‑3天后制备饱和过夜培养液，取菌液稀释于液体YES培养基中培养；c)细胞‑‑染料复合物制备：细胞培养到指定时间点，取菌液加入Phloxin B染料，避光染色细胞；d)细胞‑‑染料复合物检测：将染色后的细胞用PBS洗3次后，荧光显微镜下观察，统计死活细胞比例，得出存活率。本发明方法具有工艺简单、检测成本低、检测效率高等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞 染料复合物 检测 染料 细胞培养 制备 细胞衰老 种检测 储液 培养液 荧光显微镜 避光染色 酵母菌株 菌液稀释 存活率 培养基 时间点 染色 活化 菌液 接种 饱和 英文 观察 统计 | ||
【主权项】：
1.一种检测细胞衰老的方法，将染料食品红104(英文名Phloxin B，CAS：18472-87-2)结合到待检测裂殖酵母细胞中，形成细胞--染料复合物，加以检测。包括以下步骤：a)染料储液制备：将染料Phloxin B固体粉末配制成1mg/ml的储液；b)细胞培养：将待检测的裂殖酵母菌株活化后，接种于2.5ml YES液体培养基中，制备饱和过夜培养液，测定其OD600 ，取一定菌液稀释到装有新鲜YES液体培养基的三角瓶中，使其起始浓度为1×105 cells/ml，即A600 ＝0.01，30℃恒温培养，摇床转速220rpm；c)细胞--染料复合物制备：在一定时间点测定细胞存活率，取菌液测定其OD600 ，取0.5OD600 的菌液，离心，用无菌水洗涤细胞一次，加入Phloxin B，避光染色细胞2h；d)细胞--染料复合物检测：用PBS洗涤细胞3次后，将细胞置于载玻片上，荧光显微镜下检测细胞存活率。
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