[发明专利]面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法

摘要

本发明公开了一种面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法，建立了西红花药材质量控制方法，分离出12个主要的西红花苷类成分，以相对稳定、价廉的西红花苷‑Ⅰ为内参物，采用面积归一化法对西红花药材中西红花总苷进行含量测定，解决HPLC法测定西红花药材时多个西红花苷类成分的分离以及含量测定时多个西红花苷对照品不易获得的问题。以西红花苷‑Ⅰ为内参物，建立了西红花苷‑Ⅰ对西红花苷‑Ⅱ的相对校正因子，利用相对校正因子计算西红花苷‑Ⅱ的含量；并与药典采用的外标法测定的32批西红花中西红花苷‑Ⅰ和Ⅱ含量进行比较，以验证一测多评法的可行性。解决了药典测定方法中西红花苷‑Ⅱ对照品性质不稳定、价格昂贵的问题。

主权项

1.一种面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法，其特征在于，包括步骤： a.确定色谱条件，色谱条件为UltimateXBC18色谱柱，色谱柱为250mm×4.6mm,5μm；柱温：30℃；流动相：水‑甲醇，梯度洗脱，0‑60min，甲醇：20％‑100％；DAD检测器波长范围200‑600nm，检测波长440nm，流速：1.0mL·min‑1；进样量：10μL； b.制备对照品溶液：混合对照品溶液：精密称取西红花苷‑Ⅰ对照品和西红花苷‑Ⅱ对照品，置于棕色量瓶中，用稀乙醇溶解并定容至刻度，得混合对照品溶液，摇匀，备用；西红花苷‑Ⅰ对照品溶液：精密称取西红花苷‑Ⅰ对照品置棕色量瓶中，用稀乙醇溶解并定容至刻度，得西红花苷‑Ⅰ对照品溶液； c.制备供试品溶液：参照中国药典2015年版西红花项下，称取西红花样品粉末约10mg，精密称定，置50mL棕色量瓶中，加稀乙醇40mL，冰浴超声：250W、40KHz处理20min，放置室温，加乙醇定容至刻度，摇匀，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液；d.根据2015年版中国药典的外标法定量西红花苷‑Ⅰ和苷‑Ⅱ的含量； e.一测多评法QMSA测定西红花苷‑Ⅰ和苷‑Ⅱ的含量；f.紫外分光光度法测定总西红花苷的含量；g.面积归一化法测定总西红花苷的含量，精密吸取供试品溶液及步骤b中对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定，测定时间为不少于60分钟，同时进行质谱分析，质谱条件为：离子源：大气压电喷雾离子源；检测模式：正负离子；全扫描质核比：50‑1200 m/z；干燥气温度：350℃，干燥气流量：12.0L·min‑1，雾化气压力：35.0psi；毛细管电压：4.5kV；碰撞电压1.0V；进入质谱的流动相流速分流至0.4mL·min‑1，以西红花苷‑Ⅰ为对照，按C总苷＝(C苷‑Ⅰ×A总苷)/A苷‑Ⅰ计算总西红花苷的含量，其中A苷‑Ⅰ为样品中西红花苷‑Ⅰ色谱峰峰面积；A总苷为西红花样品440nm下12个西红花苷类色谱峰峰面积之和；C苷‑Ⅰ为外标法测定的西红花样品中西红花苷‑Ⅰ的质量浓度；C总苷为西红花样品中总西红花苷质量浓度。