[发明专利]甲状腺癌易感基因检测试剂盒

摘要

本发明提供了一种甲状腺癌易感基因检测试剂盒。该试剂盒包括检测XRCC1基因Arg399Gln位点及hMSH2基因第13号外显子序列特异性引物与DNA测序引物、PCR反应组件等。本发明的试剂盒通过检测与甲状腺癌发生密切相关的XRCC1与hMSH2基因信息来评估受检者甲状腺癌患病的风险级别，并最终根据每一位受检者的基因检测结果从基因层面指导受检者有针对性的预防甲状腺癌的发生，降低甲状腺癌的发病几率。本发明检测结果准确，可靠，方法易普及推广。 1

主权项

1.一种检测甲状腺癌易感基因突变的试剂盒，其特征在于，包含如下扩增引物组和测序引物：

1)扩增引物：

SEQ.ID NO.1：5'CAGCAGCCCACCTATAATAC 3'

SEQ.ID NO.2：5'GATCCAGGATGAGAGGGCTGAG 3'

SEQ.ID NO.3：5'TTAGTAAATTATCTCACAGGCA3'

SEQ.ID NO.4：5'TTAAACTAAGACAAACATTC 3'

2)测序引物：

SEQ.ID NO.5：5'GGACCTTAGA AGGTGACAGT 3'

SEQ.ID NO.6：5'ATGGTCTTTCTAGGCCACAG 3'。

2.根据权利要求1所述的检测甲状腺癌易感基因突变试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括DNA聚合酶、PCR缓冲液、dNTPs、4条扩增引物、2条测序引物；所述4条扩增引物其序列如SEQ.ID NO.1‑SEQ.ID NO.4所示，其中SEQ.ID NO.1和SEQ.ID NO.2、SEQ.ID NO.3和SEQ.ID NO.4分别用于XRCC1基因Arg399Gln位点、hMSH2基因第13号外显子片段的扩增；所述2条测序引物其序列如SEQ.ID NO.5、SEQ.ID NO.6所示，其中SEQ.ID NO.5、SEQ.ID NO.6分别用于XRCC1基因Arg399Gln位点、hMSH2基因第13号外显子片段的测序。

3.根据权利要求2所述的检测甲状腺癌易感基因突变的试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶的酶活力单位浓度为5U/uL，具有耐热性能；所述PCR缓冲液是由pH＝8.2的100mmol/L Tris‑HCl、500mmol/L KCl和10mmol/L MgCl2组成；所述dNTPs是由dATP、dTTP、dCTP和dGTP各2.5mmol/L混合而成的；所述扩增引物的浓度均为10umol/L。

4.一种利用权利要求2‑3中任一项所述试剂盒的检测甲状腺癌易感基因突变的方法，其特征在于所述方法的步骤如下：

1)样本采集和基因组DNA提取：采集或取出待测生物样本，利用商品化的试剂盒提取其基因组DNA；

2)XRCC1、hMSH2基因特定片段扩增：采用所述试剂盒分别配制XRCC1、hMSH2基因外显子组合的扩增体系2管；每管扩增体系除了扩增引物不同外其余均相同，引物包括以下组合：第1管体系包含SEQ.ID NO.1‑SEQ.ID NO.2扩增引物；第2管体系包含SEQ.ID NO.3‑SEQ.ID NO.4扩增引物；对于25uL体系具体为2.5uL的10×PCR缓冲液，2uL的dNTPs，每条扩增引物1uL，0.2uLDNA聚合酶，20ng基因组DNA，最终添加灭菌去离子水补足至25uL；扩增条件均为：95℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸2min，循环35次；72℃终延伸10min；

3)目的基因片段的割胶回收：所有的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，在1ug/ml的EB溶液中染色10min并用清水脱色后置于凝胶成像系统上拍照和分析，以DNA Marker条带为标准，选择正常体系中各外显子扩增产物浓度不低于10ng/uL的条带进行割胶，并用商品化的凝胶纯化试剂盒进行回收；

4)目的基因片段序列测定：对于割胶回收产物，按照DNA片段测序的标准操作进行测序和分析，依据所有测序峰图最终分析目的基因片段的序列；

5)突变结果判定和应用：通过对受检者基因序列的分析，出具甲状腺癌易感基因风险评估分析报告单。该试剂盒包括检测XRCC1基因Arg399Gln位点、hMSH2基因13号外显子上的SNP位点信息以及遗传风险评估结果。除此之外，根据受检者的风险级别，并由医师向受检者详细说明和解读甲状腺癌易感基因检测报告单。