[发明专利]SPOP及突变体表达的C4-2稳定细胞系及构建方法在审
| 申请号： | 201611133369.5 | 申请日： | 2016-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN108220242A | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 朴海龙;颜敏 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/66 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物医学研究领域，建立了SPOP及其突变体高表达的前列腺癌C4‑2细胞系。通过引物合成，PCR反应，酶切反应，将SPOP野生型及其突变体1和突变体2基因分别成功连接到了Ploc.rfp载体上。通过酶切反应和测序验证了质粒的正确性。接下来，我们通过在HEK293T细胞中构建慢病毒的方法，收集含有慢病毒的细胞培养液，用于前列腺癌C4‑2细胞的感染。经过12‑16天8‑12μg/mL的blasticidin筛选，得到SPOP野生型及其突变体1和突变体2高表达的C4‑2细胞系。本专利为研究前列腺癌SPOP突变所造成的代谢紊乱提供了研究体系。 | ||
| 搜索关键词： | 突变体 前列腺癌 酶切反应 高表达 慢病毒 野生型 构建 生物医学研究 稳定细胞系 细胞培养液 代谢紊乱 突变体表 引物合成 测序 质粒 突变 筛选 验证 细胞 基因 研究 感染 成功 | ||
【主权项】：
1.SPOP野生型及突变1和突变体2表达的C4‑2稳定细胞系，此C4‑2细胞系构建中所用的质粒使用Ploc.rfp载体克隆，所述Ploc.rfp载体中分别克隆了SPOP野生型、突变体1质粒或突变体2基因；突变体1为SPOP野生型中第87位氨基酸Y转变N的突变质粒(Y87N)，突变体2为SPOP野生型中第133位氨基酸F转变L的突变质粒(F133L)。
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