[发明专利]岩白菜素的偶联物及其制备方法与应用

摘要

岩白菜素的偶联物及其制备方法与应用。本发明公开了一种通式(I)的岩白菜素的偶联物，由岩白菜素与产生免疫原性的载体物质钥匙孔蓝蛋白(KLH)偶联构成，其中n为与一个钥匙孔蓝蛋白分子结合的岩白菜素的分子数，KLH为钥匙孔蓝蛋白，分子量范围是450KDa～13000KDa。本发明还公开了所述的偶联物的制备方法，即将岩白菜素与产生免疫原性的载体物质连接起来，结合为具有诱发动物免疫系统产生抗体的偶联物。本发明的岩白菜素的偶联物通过免疫新西兰大白兔，制备了效价达到1∶16000的抗血清，其最低检测限为16.03ng/ml。本发明具有简便，快捷，特异，准确的特点，为制备岩白菜素的酶联免疫检测试剂盒提供了基础。

主权项

1.一种岩白菜素的偶联物，由岩白菜素半抗原与产生免疫原性的载体物质偶联而成，所述载体物质为优选蛋白质，蛋白片段，合成多肽或半合成多肽。

2.如权利要求1所述的岩白菜素的偶联物，其中所述产生免疫原性的载体物质是钥匙孔蓝蛋白。

3.如权利要求2所述的岩白菜素的偶联物，其结构通式如(I)

 

其中，n为与一个钥匙孔蓝蛋白结合的岩白菜素的分子个数，KLH为钥匙孔蓝蛋白(Keyhole Limpet Hemocyanin)，分子量范围是450KDa～13000KDa；

上述偶联物显示出如下物化特征：

(1)外观：白色粉末状固体；

(2)紫外吸收光谱：343nm。

4.如权利要求1～3中任一项所述的岩白菜素的偶联物的制备方法，其特征是：将岩白菜素与产生免疫原性的载体物质连接起来，结合为具有诱发动物免疫系统产生抗体的偶联物，并保持该偶联物的生物活性不变。

5.如权利要求4所述的岩白菜素的偶联物的制备方法，由如下步骤完成：

(1)溶液A的制备：将10.0mg岩白菜素，9.88mg N，N′‑羰基二咪唑(CDI)，0.37mg 4‑二甲氨基吡啶(DMAP)以摩尔比1∶2∶0.1溶解于二甲基甲酰胺(DMF)中，反应生成岩白菜素与N，N′‑羰基二咪唑的活性中间体，备用；

(2)溶液B的制备：将30mg KLH溶于10ml 0.01M磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，备用；

(3)在室温下，将溶液A逐滴加入到不断搅拌状态下的溶液B中，反应6h，得溶液C；

(4)溶液C转移到透析袋中，用上述磷酸缓冲液搅拌透析72h，之后更换用蒸馏水透析20～30h，每6h更换一次透析液，透析过程在4℃下进行；

(5)冻干透析液，得到白色岩白菜素的偶联物。

6.如权利要求5所述的岩白菜素的偶联物的制备方法，其特征是：步骤(1)所述的岩白菜素与N，N′‑羰基二咪唑，4‑二甲氨基吡啶摩尔比为1∶2∶0.1。

7.如权利要求5所述的岩白菜素的偶联物的制备方法，其特征是：步骤(2)所述的岩白菜素与钥匙孔蓝蛋白的质量数比为1∶3。

8.权利要求1～3中任一项所述的岩白菜素的偶联物作为免疫原在制备岩白菜素特异反应抗体中的应用。