[发明专利]DNA文库的制备方法以及试剂盒有效
申请号: | 201611154433.8 | 申请日: | 2016-12-14 |
公开(公告)号: | CN106835291B | 公开(公告)日: | 2019-02-01 |
发明(设计)人: | 汉雨生;张之宏;揣少坤 | 申请(专利权)人: | 广州燃石医学检验所有限公司 |
主分类号: | C40B50/06 | 分类号: | C40B50/06 |
代理公司: | 北京市柳沈律师事务所 11105 | 代理人: | 张晓飞;易方方 |
地址: | 510000 广东省广州市广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明提供了一种DNA文库制备及特异捕获的方法以及试剂盒,所述方法适用于cfDNA、白细胞gDNA、以及来源于组织样本的DNA文库的构建及特定靶基因区域的杂交捕获。在本发明DNA文库的制备方法中,末端修复以及3’端加A在同一个反应体系中进行,并改进了杂交投入量,对杂交捕获中的阻断制剂进行优化,由此获得了更高的捕获效率、更高的文库多样性、以及更均一的覆盖度,尤其适合微量以及低丰度突变的样本文库的构建,有利于实现技术流程上的节约。本发明的方法能够便于实现靶基因的所有类型的变异,如突变、缺失、插入、融合、以及拷贝数扩增的检测,克服了目前在DNA水平上通过PCR的方法富集靶基因序列,但只能检测靶基因的突变和缺失,无法检测融合的缺点。 | ||
搜索关键词: | dna 文库 制备 方法 以及 试剂盒 | ||
【主权项】:
1.DNA文库的制备方法,其包括预文库和终文库的制备过程,其中所述的预文库制备过程包括DNA的制备、末端修复和3’端加A,接头连接,接头连接产物纯化,预文库扩增,扩增的预文库纯化,所述的终文库制备过程包括预文库杂交,捕获洗脱,终文库制备,以及终文库的纯化过程;其中所述预文库杂交过程中使用双向短链阻断剂;所述的双向短链阻断剂结构如下:
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