[发明专利]一种基于通用探针技术的荧光定量PCR方法

摘要

本发明涉及荧光定量PCR领域，提供了一种基于通用探针技术的荧光定量PCR方法，该方法既有Taqman探针特异性高的优点，又降低了开发成本，具有良好的推广价值。两种通用探针技术是本发明的核心部分，端通用探针技术的探针为双标记探针，探针与上游组合特异引物的特定序列互补，中间特异引物起到类似Taqman探针特异性的作用，并引发探针的水解和信号释放。中间通用探针技术的探针为3’端单标记荧光探针，探针与中间组合特异引物的特定序列互补，中间组合特异引物起到类似Taqman探针特异性的作用，同时该引物5’端标记有淬灭基团，当该引物在PCR反应中水解后，淬灭基团游离，探针的信号即可释放。

主权项

1.一种基于通用探针技术的荧光定量PCR方法，其特征在于：荧光定量PCR反应所用的探针为通用探针，根据探针结合的位置，该方法又分为基于端通用探针的荧光定量PCR和基于中间通用探针的荧光定量PCR；基于端通用探针的荧光定量PCR反应分为两个阶段，第一个阶段为普通PCR反应，引物包括，上游组合特异引物，下游特异引物，反应条件同于一般PCR反应；第二阶段为荧光定量PCR反应，利用第一阶段的PCR纯化产物作为模板，引物有中间特异引物，上游通用引物和端通用探针，反应条件同于一般荧光定量PCR反应；基于中间通用探针的荧光定量PCR反应只有一个阶段，其引物包括，上游特异引物，下游特异引物，中间组合特异引物，中间通用探针，反应条件同于一般荧光定量PCR反应。