[发明专利]体外定量测定vWF-CP酶活性的方法、检测试剂盒及制备方法

摘要

本发明涉及体外定量测定vWF‑CP酶活性的方法、检测试剂盒及制备方法；方法包括试纸条制备、反应液制备、显色反应、酶活性计算等步骤，检测试剂盒包括试纸条、标准品1、标准品2、vWF‑CP底物、工作液和终止液，试纸条上的金标抗体为胶体金标记的抗vWF‑CP底物抗体，T线抗体为抗vWF‑CP底物抗体，C线抗体为抗金标抗体抗体，金标抗体与T线抗体结合vWF‑CP底物上不同的位点；标准品1和标准品2分别为高vWF‑CP酶相对活性和低vWF‑CP酶相对活性的制品；工作液为含二价金属离子的缓冲液，终止液为含能络合二价金属离子的缓冲液；检测试剂盒的制备方法包括试纸条制备、标准品制备、vWF‑CP底物制备、工作液和终止液制备等步骤；本发明的方法、检测试剂盒，检测快捷、灵敏度高、准确性好。

主权项

1.一种体外定量测定vWF‑CP酶活性的非疾病诊断和治疗的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、试纸条制备：将样品垫、金标垫、NC膜、吸水垫依次组装，所述NC膜上设置有检测线和质控线，所述金标垫、检测线和质控线上分别包被有金标抗体、T线抗体和C线抗体；S2、反应液制备：将标准品1、标准品2、待测样品分别与vWF‑CP底物混合反应一段时间后终止反应；S3、显色反应：将各反应液分别加入至试纸条的样品垫，一段时间后扫描各试纸条的检测线读数值；S4、酶活性计算：将待测样品显色反应后的检测线读数值与标准品1和标准品2显色反应后的检测线读数值进行比较，计算得到待测样品中vWF‑CP酶活性；其中，所述金标抗体为胶体金标记的抗vWF‑CP底物抗体，所述T线抗体为抗vWF‑CP底物抗体，所述C线抗体为抗金标抗体抗体，所述金标抗体与T线抗体结合vWF‑CP底物上不同的位点；所述标准品1和标准品2分别为高vWF‑CP酶相对活性和低vWF‑CP酶相对活性的制品；所述vWF‑CP底物包括vWF功能区氨基酸序列，并在vWF功能区氨基酸序列的N端和C端分别结合有HIS标签氨基酸序列和FLAG标签氨基酸序列，所述vWF功能区氨基酸序列为vWF73，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述vWF‑CP底物的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。