[发明专利]快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法

摘要

本发明涉及一种植物愈伤组织诱导及培养的方法，尤其是一种偏穗鹅观草无毒条件下种子消毒及快速诱导繁殖其无菌实生苗下胚轴愈伤组织的方法。一种快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法，其主要特点在于步骤如下：(1)无毒条件下无菌外植体的获得：(2)愈伤组织诱导：(3)愈伤组织增殖培养：将步骤(2)获得的颜色黄绿，质地疏松的愈伤组织切割成直径约0.1‑0.2cm的小块，然后转接到诱导愈伤组织增殖培养基中，培养25‑30d后继续转接到新的诱导愈伤组织增殖培养基中进行继代增殖，最终获得颜色黄绿，结构致密的优良愈伤组织材料。该方法能够在无毒条件下进行偏穗鹅观草的种子消毒并且快速诱导出其无菌实生苗下胚轴的愈伤组织，经过继代繁殖后，获得大量颜色黄绿，结构松脆的优良愈伤组织材料，可为偏穗鹅观草下胚轴组织培养以及细胞悬浮培养提供技术支撑。

主权项

1.一种快速诱导繁殖偏穗鹅观草下胚轴愈伤组织的方法，其特征在于步骤如下：（1）无毒条件下无菌外植体的获得：将偏穗鹅观草种子置于50%~55%的浓硫酸中,在条件为28℃~30℃，210 r/min~220 r/min的摇床里振荡0.9~1.2小时做脱皮催芽处理，之后用蒸馏水洗去浓硫酸并置于超净工作台，首先用无菌水清洗种子，然后用75%的酒精振荡冲洗2.5~3.5min，紧接着用无菌水将种子表面的酒精清洗干净，再用20%~25%的次氯酸钠振荡冲洗14~16min,最后用无菌水将种子表面的次氯酸钠清洗干净，获得偏穗鹅观草无菌种子，将灭菌后的种子放置于培养无菌实生苗的培养基中培养10‑15 d，获得无菌实生苗的下胚轴幼嫩部分作为诱导愈伤的外植体；（2）愈伤组织诱导：将步骤（1）获得的无菌实生苗下胚轴横切为0.3‑0.5cm长的小段作为诱导愈伤的材料，接种于诱导愈伤组织培养基上培养25‑30d，诱导愈伤发生；（3）愈伤组织增殖培养：将步骤（2）获得的颜色黄绿，质地疏松的愈伤组织切割成直径为0.1‑0.2cm的小块，然后转接到诱导愈伤组织增殖培养基中，培养25‑30d后继续转接到新的诱导愈伤组织增殖培养基中进行继代增殖，最终获得颜色黄绿，结构致密的优良愈伤组织材料；所述步骤（1）中所述的培养无菌实生苗的培养基为MS营养液、5‑7 g/L琼脂、20‑30g/L蔗糖、0.05‑0.1g/L肌醇组成，pH=5.7‑5.8；步骤（2）中所述的诱导愈伤组织培养基、步骤（3）中所述的诱导愈伤组织增殖培养基均为MS诱导培养基，其配比为：3.0‑5.0 mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸， 5‑7 g/L 琼脂，20‑30g/L蔗糖，0.05‑0.1g/L肌醇组成，pH=5.7‑5.8。