[发明专利]一种提高传染性法氏囊病病毒效价稳定性的方法

摘要

本发明提供了一种提高传染性法氏囊病病毒效价稳定性的方法，该技术方案以去除作为抗原制备的初始毒种中所存在的支原体或鸡网状内皮组织增生症病毒为目的，先将毒种回归鸡体，经传代后接种于CEF细胞驯化，而后再通过蚀斑克隆法纯化病毒；在此基础上，本发明针对传染性法氏囊病病毒的自身特性以及外源病毒的特点设计了具体的操作工艺。本发明利用鸡体回归和蚀斑克隆法纯化病毒，去除了原有疫苗株存在的外源病毒污染，获得了病毒增殖力强、纯度高、效价稳定性好的纯净疫苗株。利用本发明制备的半成品不同批次间病毒效价浮动为10^0.1～0.3TCID₅₀/0.1mL，提高了病毒效价的准确性和稳定性。

主权项

1.一种提高传染性法氏囊病病毒效价稳定性的方法，其特征在于包括以下步骤：1)取传染性法氏囊病病毒接种15～30日龄SPF鸡，72～96小时后剖检取出法氏囊组织，研磨，对研磨液进行10^‑1～10^‑3倍稀释；2)以步骤1)所得产物作为步骤1)所述传染性法氏囊病病毒，再重复步骤1)2～4次，得到病毒组织液；3)取以9～11日龄的SPF鸡胚所制备的CEF细胞，以2×10⁶～3.0×10⁶细胞量/mL的接种量接种至含有5～10％(v/v)胎牛血清的M199培养基中培养过夜；4)取步骤2)所得的病毒组织液稀释10^‑2～10^‑3倍后接种于步骤3)所得产物中，培养48～72小时后收获病毒液；5)以步骤4)所得产物作为步骤4)所述病毒组织液，再重复步骤4)1～2次，得到CEF驯化种毒；6)对步骤5)所述CEF驯化种毒进行蚀斑纯化，驯化过程包括：A)取步骤5)所述CEF驯化种毒，进行梯度稀释后分别接种于铺满DF‑1细胞单层的细胞培养板，于35～40℃吸附1h，弃去病毒液，加入含琼脂糖的病毒维持液，35～40℃条件下倒置培养72～96小时，挑取稀释倍数最大孔的蚀斑，将其溶于不含血清的病毒培养液，即得到蚀斑病毒；B)以所述蚀斑病毒作为步骤A)所述CEF驯化种毒，再重复步骤A)2～4次，收获病毒。