[发明专利]一种丝素亲和肽的筛选方法

摘要

本发明公开了一种丝素亲和肽的筛选方法。制备丝素材料，利用丝素膜材料对各种噬菌体进行筛选，获得能够与丝素膜特异性结合的噬菌体，将步骤中与丝素材料特异性结合的噬菌体进行基因测序，获得相应的基因序列，进而可推到出其氨基酸序列。本发明所筛选的噬菌体对丝素材料具有很高的亲和性，为丝素材料的鉴定与分析提高更多的选择，应用前景广阔。

主权项

1.一种丝素亲和肽的筛选方法，其特征是采用如下步骤：1)制备丝素膜材料；所述步骤1)中的丝素膜材料采用以下方式进行制备：先将蚕丝蛋白粉末溶于有机溶剂或者水中形成蚕丝蛋白溶液，将蚕丝蛋白溶液滴在聚乙烯板上风干，加酒精处理使蚕丝蛋白固化，得到不溶解于水的丝素膜；2)利用丝素膜材料对各种噬菌体进行筛选，获得能够与丝素膜特异性结合的噬菌体；所述步骤2)具体为：a.封闭丝素膜材料：将丝素膜材料加入含有TBS和BSA的缓冲液；b.丝素膜材料对噬菌体库的筛选：将噬菌体肽加入到丝素膜的缓冲液中，常温摇床中以160rpm转速下摇振0.5‑8h；c.洗涤：用洗涤液将丝素膜洗涤1‑10遍；d.洗脱：将洗涤液除去，加入洗脱液常温孵育1‑20分钟，将与丝素膜材料特异性结合的噬菌体洗脱下来；e.中和：加入中和液，使得洗脱后的噬菌体液与中和液混匀后呈中性；f.噬菌体扩增：将中和后的噬菌体液转入到ER2738菌中，在37℃温度的摇床中以150‑220rpm转速摇振3‑24h，得到噬菌体和ER2738菌混合液；g.噬菌体纯化：将噬菌体和ER2738菌混合液进行离心，再加入到PEG和NaCl的混合液中进行纯化，得到亲和丝素膜材料的噬菌体菌液；i.将步骤a～g经过2‑6次重复循环之后，得到与丝素膜材料特异性结合的噬菌体液；3)将步骤(2)中与丝素膜材料特异性结合的噬菌体进行基因测序，获得相应的基因序列，进而推导出其氨基酸序列。