[发明专利]一种同序双扩增的数字定量PCR方法有效

专利信息
申请号: 201611243465.5 申请日: 2016-12-28
公开(公告)号: CN106834441B 公开(公告)日: 2020-02-28
发明(设计)人: 江洪;曲越;曲超琪 申请(专利权)人: 澳門帝傑數碼基因有限公司
主分类号: C12Q1/6851 分类号: C12Q1/6851;C12Q1/6848
代理公司: 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 代理人: 俞梁清
地址: 中国澳门提督*** 国省代码: 澳门;82
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摘要: 发明公开了一种同序双扩增的数字定量PCR方法,该方法是一种倍比稀释样本定量PCR方法,其特征是先用3’端缩短3‑6b碱基的短靶引物预先扩增10‑15个循环而预放大102‑104倍,然后用中部同序的长靶引物PCR反应液于同管内稀释预扩液10‑20倍再荧光PCR 30‑35循环,矿物油密闭下无热盖扩增,预扩短引物末端5‑8b同序且与中部同序的长靶引物同源而不易引物间聚合,稀释后35循环内无非特异性,以确保≥“1”分子有效检测和“0”无扩增反应的数字dPCR方法。
搜索关键词: 一种 扩增 数字 定量 pcr 方法
【主权项】:
一种同序双扩增的数字定量PCR方法,其特征在于,为倍比稀释样本的双扩增定量PCR,包括以下步骤:先用3’末端缩短3‑6b碱基的短靶引物于小体积PCR反应液预扩增10‑15个循环,接着用末端不缩短的中部同序靶引物PCR液于同管内稀释预扩液10‑20倍大体积荧光PCR 30‑35个循环,矿物油密闭条件下无热盖扩增,总反应大于40个循环的同序双扩PCR确保≥“1”分子有效检出和无模板“0”无非特异性反应,根据样本稀释倍数、体积推算靶分子定量。
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