[发明专利]亲水性纳米复合材料结合质谱分析鉴定糖基化肽段的方法有效
| 申请号： | 201611270469.2 | 申请日： | 2016-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN106770614B | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 张祥民;冯小燕 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | G01N27/62 | 分类号： | G01N27/62 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 陆飞;陆尤 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于纳米技术领域，具体为一种亲水性纳米复合材料结合质谱分析鉴定糖基化肽段的方法。本发明将纳米复合材料配制成为分散液，溶剂为超纯水，将该分散液与糖基化肽段溶液在80%乙腈/0.1%甲酸缓冲液中混合，在酶解仪中孵育；在外磁场作用下通过磁性分离纳米复合材料，用80%乙腈/0.1%甲酸缓冲液洗涤；再用50%乙腈/0.1%甲酸缓冲液洗脱材料上富集的糖基化肽段，结合质谱分析鉴定。该亲水性纳米复合材料为磁性石墨烯表面包覆聚(二烯丙基二甲基氯化铵)和纳米金颗粒并修饰葡萄糖的纳米复合材料。本方法操作简单，成本低廉，灵敏迅速，具有较高灵敏度和较好选择性，十分适用于复杂生物样品中的糖基化肽段的检测。 | ||
| 搜索关键词： | 糖基化肽段 纳米复合材料 甲酸缓冲液 亲水性纳米 分析鉴定 结合质谱 复合材料 乙腈 分散液 二烯丙基二甲基氯化铵 复杂生物样品 纳米技术领域 葡萄糖 纳米金颗粒 表面包覆 磁性分离 磁性石墨 高灵敏度 超纯水 外磁场 溶剂 孵育 富集 酶解 洗脱 修饰 配制 洗涤 灵敏 检测 | ||
【主权项】：
1.一种亲水性纳米复合材料结合质谱分析鉴定糖基化肽段的方法，其特征在于，具体步骤如下：（一）将亲水性纳米复合材料配制成为0.5‑10mg/mL的分散液，溶剂为超纯水，将该分散液与糖基化肽段溶液加入到上样缓冲液中混合，在酶解仪中孵育15‑60分钟；该上样缓冲液由超纯水配制，在100 ml上样缓冲液中有75ml~90ml乙腈、0.05ml~1ml甲酸与79mg~197.5mg碳酸氢铵；（二）在外磁场作用下通过磁性分离纳米复合材料，用缓冲液洗涤，该缓冲洗涤液用超纯水配制，100ml缓冲洗涤液中含有75ml~90ml乙腈、0.05ml~1ml甲酸与79mg~197.5mg碳酸氢铵；随后用混合液洗脱，该混合洗脱液用超纯水配制，100ml混合洗脱液中含有30ml~55ml乙腈、0.05ml~1ml甲酸缓冲液与79mg~197.5mg碳酸氢铵；（三）取1‑3μL洗脱液直接在MALDI‑TOF MS的进样靶板上点靶，干燥后再点加1‑2μL浓度为15‑25mg/mL的2，5‑二羟基苯甲酸溶液，形成基质结晶，进行质谱分析；其中，所述的纳米复合材料为磁性石墨烯表面包覆聚(二烯丙基二甲基氯化铵)和纳米金颗粒并修饰葡萄糖的亲水性纳米复合材料。
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