[发明专利]一种肺癌相关基因突变检测方法、引物及试剂

摘要

本发明公开了一种基于高通量测序平台的肺癌相关基因突变检测方法、引物及试剂，用于检测肺癌相关基因EGFR、KRAS、BRAF、PIK3CA四种基因的50个突变位点。检测方法包括样本DNA提取、多重PCR富集目的片段、引物消除、接头连接、文库扩增、文库检测、高通量测序等步骤。本发明降低了建库成本，减少了PCR扩增中引入突变的可能性，使得测序结果更加精确，提高检测通量及检测灵敏度，同时可以为肺癌的分子诊断及个体化用药提供参考。

主权项

一种肺癌相关基因突变检测方法、引物及试剂，其特征在于基于高通量测序技术检测肺癌相关基因EGFR、KRAS、BRAF、PIK3CA四种基因外显子的50个突变位点，包括如下：且所述的突变位点1‑50各自对应的多重PCR扩增引物依次为：1)1‑3的引物对：上游引物：5’‑TGTGGAGCCTCTTACACCCA‑3’下游引物：5’‑GTGCCAGGGACCTTACCTTATAC‑3’；2)4‑22的引物对：上游引物：5’‑ACGTCTTCCTTCTCTCTCTGTCA‑3’下游引物：5’‑CTGAGGTTCAGAGCCATGGA‑3’；3)23‑27的引物对：上游引物：5’‑CCACACTGACGTGCCTCTC‑3’下游引物：5’‑GTCTTTGTGTTCCCGGACATAGT‑3’；4)28‑29的引物对：上游引物：5’‑CGCAGCATGTCAAGATCACAGAT‑3’下游引物：5’‑GCATGTGTTAAACAATACAGCTAGTG‑3’；5)30‑36的引物对5：上游引物：5’‑CAAAGAATGGTCCTGCACCAGTAATAT‑3’下游引物：5’‑AGGCCTGCTGAAAATGACTGAATATAA‑3’；6)37‑40的引物对：上游引物：5’‑TCCTCATGTACTGGTCCCTCATT‑3’下游引物：5’‑GTAAAAGGTGCACTGTAATAATCCAGACT‑3’；7)41‑43的引物对：上游引物：5’‑CATACTTACCATGCCACTTTCCCTT‑3’下游引物：5’‑TTTCTTTTTCTGTTTGGCTTGACTTGA‑3’；8)44‑47的引物对：上游引物：5’‑CCACAAAATGGATCCAGACAACTGT‑3’下游引物：5’‑GCTTGCTCTGATAGGAAAATGAGATCTA‑3’；9)48‑49的引物对：上游引物：5’‑CAGAGTAACAGACTAGCTAGAGACAATGA‑3’下游引物：5’‑GCACTTACCTGTGACTCCATAGAAA‑3’；10)50的引物对：上游引物：5’‑TGGAATGCCAGAACTACAATCTTTTGAT‑3’下游引物：5’‑GTGGAAGATCCAATCCATTTTTGTTGTC‑3’。