[发明专利]捕获、检测和定量小RNA的方法、组合物与试剂盒有效
| 申请号： | 201680015631.8 | 申请日： | 2016-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN107429296B | 公开（公告）日： | 2022-01-28 |
| 发明（设计）人： | C·刘;S·董;L·黄 | 申请（专利权）人： | 生命技术公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/6806;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京派特恩知识产权代理有限公司 11270 | 代理人： | 康艳青;姚开丽 |
| 地址： | 美国加*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本发明提供了用于捕获、检测和定量成熟小RNA的方法、组合物与试剂盒。所述方法的实施例包括通过将一个5'连接衔接子连接至5'端并且使3'端聚腺苷酸化以对成熟小RNA的5'端和3'端加尾。其他实施例包括通过一个通用反转录引物反转录连接衔接子的聚腺苷酸化成熟小RNA以及通过通用引物扩增cDNA。 | ||
| 搜索关键词： | 捕获 检测 定量 rna 方法 组合 试剂盒 | ||
【主权项】：
一种用于检测一个成熟小RNA的方法，所述方法包括：提供包含一个成熟小RNA的样本；使所述成熟小RNA的3'端聚腺苷酸化，并且在单链RNA连接酶存在的状态下将一个单链衔接子连接至所述成熟小RNA的5'端，由此形成一个RNA连接产物，其中所述衔接子包含一个通用正向引物部分；使用一个反转录(RT)引物反转录所述RNA的连接产物，从而形成所述RNA连接产物的一个cDNA产物，其中所述RT引物包含一个poly(T)部分和一个尾巴部分，而所述尾巴部分包含一个通用反向引物部分；使用一组第一正向和反向引物对扩增所述cDNA产物以形成一个扩增产物，其中所述第一正向引物可与所述通用正向引物部分或其互补序列杂交，并且所述第一反向引物可与所述通用反向引物部分或其互补序列杂交；以及通过定量实时聚合酶链反应(qPCR)检测对应于所述成熟小RNA的所述扩增产物。
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