[发明专利]通过注射进行的基于液滴的选择

摘要

一种用于在微流体装置中鉴定编码感兴趣的酶的多核苷酸的方法，该方法通过以下各项进行：提供包含编码一种或多种酶的多核苷酸的文库的微流体液滴的乳液，引入允许将该多核苷酸PCR扩增到选择的液滴中的浓缩PCR溶液和/或将致死溶液引入取消选择的液滴中，并且鉴定编码感兴趣的酶的多核苷酸。

主权项

一种用于在微流体装置中鉴定编码感兴趣的酶的多核苷酸的方法，所述方法包括以下步骤：a)提供包含编码一种或多种酶的多核苷酸的文库的微流体液滴的乳液，其中每个液滴包含该文库的至多单个成员，并且表达该多核苷酸的文库以产生该一种或多种酶；b)将包含该一种或多种酶的底物的等分试样引入每个液滴中，其中一种或多种感兴趣的活性酶的存在将该底物转化成可筛选的产物；c)确定含有高于预定的阈值水平的可筛选产物的阳性液滴，该预定的阈值水平反过来又确定该阴性液滴；d)引入包含核苷酸、合适的DNA聚合酶和一组PCR引物的浓缩PCR溶液的等分试样，其允许将编码该一种或多种感兴趣的酶的该多核苷酸PCR扩增到在步骤(c)中确定的每个阳性液滴中；和/或将导致DNA变性以及酶变性和/或细胞裂解的溶液的等分试样引入在步骤(c)中确定的该阴性液滴中；e)从该阳性液滴中克隆或PCR扩增编码该一种或多种感兴趣的酶的该多核苷酸；和f)从在步骤(e)中的该克隆或PCR扩增的多核苷酸鉴定编码感兴趣的酶的多核苷酸。