[发明专利]靶核酸的等温环介导扩增(LAMP)的荧光检测的方法，寡核苷酸及其试剂盒

摘要

本发明涉及基于荧光共振能量转移(FRET)机制的用于检测靶核酸序列的等温环介导(LAMP)扩增的方法。本发明还涉及适用于实施本发明的LAMP‑FRET方法的寡核苷酸的组和试剂盒。

主权项

1.一种检测靶核酸序列的环介导等温扩增(LAMP)的方法，所述方法包括以下步骤：i)使可能含有所述核酸靶序列的测试样品与具有链置换活性的DNA聚合酶和由以下组成的寡核苷酸的组接触：a.第一外部引物F3和第二外部引物B3；b.第一内部引物FIP和第二内部引物BIP，其中FIP由3’核酸序列F2和5’核酸序列F1c组成，且BIP由3’核酸序列B2和5’核酸序列B1c组成，其中F2与所述靶核酸序列的F2c区互补，且B2与所述靶核酸序列的B2c区互补，其中F2c和B2c是位于所述靶核酸序列的相反链上的非重叠区域；c.第一环引物LF和可选的第二环引物LB，其能够与所述靶核酸序列的各自的区域杂交，其中如果存在，所述环引物LF或所述环引物LB在其5'‑末端由至少一个受体荧光团标记；d.一个核酸探针，其能够在标记的LF或LB环引物的5'的位置处与所述靶核酸序列杂交，使得当所述核酸探针与所述靶核酸序列杂交时，使所述核酸探针的3′‑末端紧邻所述标记的LF或LB环引物的5'‑末端，其中所述核酸探针在其3'‑末端用能够将激发能量转移到所述LF或LB环引物的至少一个受体荧光团的至少一个供体荧光团标记，并且其中在吸收供体荧光团激发能量时，所述受体荧光团的荧光发射的强度增加；以及ii)检测作为所述靶核酸序列的LAMP扩增的指示的荧光参数的变化，其中所述荧光参数的变化是所述受体荧光团的荧光发射的强度的增加。