[发明专利]一种用于微生物法定量检测叶酸的微孔板、其试剂盒及其制备方法有效
| 申请号： | 201710001927.0 | 申请日： | 2017-01-03 |
| 公开（公告）号： | CN106701887B | 公开（公告）日： | 2020-01-17 |
| 发明（设计）人： | 刘龙飞;高天垒;卜庆婧 | 申请（专利权）人： | 北京中检葆泰生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;C12R1/225 |
| 代理公司： | 11450 北京欣永瑞知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 张庆敏 |
| 地址： | 101111 北京市大兴区北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种用于微生物法定量检测叶酸的微孔板，其由如下步骤制备而成：活化后的鼠李糖乳杆菌接种处理，然后加入海藻糖/蔗糖和氯化钙混合液制成测试菌液；再将所述测试菌液添加至微孔板各孔中，在低真空环境下加热测试菌液，最后干燥处理。本发明还提供了包含该微孔板的试剂盒及其制备方法。本发明通过在制备中加入海藻糖/蔗糖和氯化钙混合液保护剂，以及改进菌液的干燥方法，降低了试剂盒中的菌种损失，提高了叶酸检测结果的准确性。经活菌计数，上述方法制备的微孔板中的鼠李糖乳杆菌干燥泡沫中保存的活性菌种数，均超过了所添加菌液中菌种总数的93％(普通冷冻干燥法至少损失约20％的菌种)。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 微生物 法定 检测 叶酸 微孔 试剂盒 及其 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种制备用于微生物法定量检测叶酸的微孔板的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：/n1)活化鼠李糖乳杆菌，将活化后的鼠李糖乳杆菌菌株接种到乳杆菌肉汤培养基中，35-39℃培养20-24h，2000转/min离心2-3min，弃去上清液；/n2)加入9-11ml蔗糖和氯化钙混合液，混匀后离心2-3min，弃去上清液，重复前述操作一次，然后再加入9-11ml蔗糖和氯化钙混合液，混匀，制得菌悬液；吸1-2ml菌悬液至9-11ml蔗糖和氯化钙混合液中，混匀制成测试菌液；/n3)将所述测试菌液2-8μl添加至微孔板各孔中，分别在24-26mTorr、49-51mTorr、495-505mTorr、4-6Torr、49-51Torr、195-205Torr的低真空环境下加热测试菌液，使测试菌液在29-31℃的温度条件下沸腾而产生泡沫，并在所述低真空环境和室温下蒸发干燥24-48h，/n其中，所述鼠李糖乳杆菌菌株为鼠李糖乳杆菌ATCC7469，并且步骤2)中蔗糖和氯化钙混合液中，各自的浓度分别为195-205mM、9-11mM。/n
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