[发明专利]一种油菜遗传转化的方法

摘要

本发明公开了一种油菜遗传转化方法。该方法依次包括如下步骤：(1)将含有目的基因的重组表达载体导入农杆菌，得到重组农杆菌；(2)取重组农杆菌，对油菜的外植体进行侵染；(3)取所述外植体，置于共培养培养基，进行共培养；(4)取所述外植体，置于选择培养基，进行培养；(5)取所述外植体，置于分化培养基进行培养，获得分化芽；(6)取所述分化芽，置于生根培养基进行培养，获得转基因油菜。实验证明，采用本发明提供的方法进行油菜遗传转化，转化效率高(达12.0％‑12.5)，耗时短，为油菜转基因提供了强大的工具，具有非常重要的应用价值。

主权项

1.一种油菜遗传转化方法，依次包括如下步骤：（1）将含有目的基因的重组表达载体导入农杆菌，得到重组农杆菌；（2）取步骤（1）得到的重组农杆菌，对油菜的外植体进行侵染；所述油菜的外植体为油菜的子叶；（3）完成步骤（2）后，取所述外植体，置于共培养培养基，进行共培养；所述共培养培养基中含有1.0‑1.5mg/L 1‑萘乙酸、4.0‑6.0mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤和4.0‑6.0mg/L AgNO₃；所述共培养的条件为23‑27℃、暗培养3‑5天；（4）完成步骤（3）后，取所述外植体，置于选择培养基，进行培养；所述选择培养基中含有0.8‑1.2mg/L 1‑萘乙酸、2.0‑4.0mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤和80‑120mg/L头孢噻吩；所述培养的条件为23‑27℃、光暗交替培养3‑5天；（5）完成步骤（4）后，取所述外植体，置于分化培养基进行培养，获得分化芽；所述分化培养基中含有0.1‑0.3mg/L 1‑萘乙酸、1.0‑3.0mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤、30‑50mg/L卡那霉素和80‑120mg/L 头孢噻吩；所述培养的条件为23‑27℃、光暗交替培养3‑5周；（6）完成步骤（5）后，取所述分化芽，置于生根培养基进行培养；所述生根培养基中含有80‑120mg/L卡那霉素和80‑120mg/L 头孢噻吩；获得转基因油菜；所述培养的条件为23‑27℃；所述油菜为油菜品种中双4号。