[发明专利]一种枳的组织培养再生苗的培养方法

摘要

本发明公开了一种枳的组织培养再生苗的培养方法，选取枳的茎段作为组培用的外植体；对茎段进行愈伤组织诱导，成功诱导后通过切割愈伤组织进行进一步继代培养、增大并逐渐分化形成不定芽；再通过光下诱导不定芽再分化形成茎和叶；最后，经生根培养形成不定根后进行驯化移栽，然后正常培养。本发明枳的组织培养再生苗的方法，建立了枳的高效再生体系，该方法不受地区、季节、气候限制，可实现优质再生苗的工厂化规模化生产。

主权项

1.一种枳的组织培养再生苗的培养方法，其特征在于，选取枳的茎段作为组培用的外植体；对茎段进行愈伤组织诱导；成功诱导后通过切割愈伤组织进行进一步继代培养、增大并逐渐分化形成不定芽；再通过光下诱导不定芽再分化形成茎和叶；最后，经生根培养形成不定根后进行驯化移栽，然后正常培养；包括以下步骤：步骤1、外植体的选择及处理：选取枳的茎段为起始材料，消毒后作为组培用的外植体；步骤2、愈伤组织的诱导培养：将经过消毒的外植体接种于愈伤组织诱导培养基MS+6‑BA1.0‑2.0mg/L+IBA0.1‑0.2mg/L+GA30.25‑0.5mg/L上进行暗培养，茎段切口处逐渐形成愈伤组织；步骤3、愈伤组织的增殖培养：形成的愈伤组织经切割后转接到愈伤组织增殖培养基MS+6‑BA0.5‑1.0mg/L+IBA0.1‑0.2mg/L+GA30.25‑0.5mg/L上进行暗培养，愈伤组织较为迅速的生长膨大；步骤4、愈伤组织的分化及再分化培养：将增殖后的愈伤组织转移到光下培养，通过光诱导，迅速分化形成不定芽，而后缓慢分化为茎和叶；步骤5、生根成苗及驯化移栽：将再分化形成的茎和叶转移到生根培养基1/2MS+IBA0.25‑0.5mg/L上进行培养，20～30天后，长出1‑2条肉质不定根，生根成苗成为新的植株，炼苗、缓苗后正常培养。