[发明专利]一种根癌农杆菌介导的草莓高效稳定的遗传转化方法

摘要

本发明涉及一种根癌农杆菌介导的草莓高效稳定的遗传转化方法,其包括草莓无菌苗的预培养；农杆菌活化；侵染；共培养；延迟筛选；筛选和生根的过程。其优化了遗传转化的步骤，从而大幅度提高了草莓转基因效率，解决了传统农杆菌介导法转化效率低，易产生嵌合体，筛选困难，工作量大的问题，极大的提高了遗传转化效率，同时显著降低了再生芽的假阳性率。

主权项

一种根癌农杆菌介导的草莓高效稳定的遗传转化方法,其特征在于，包括：草莓无菌苗的预培养：取草莓无菌苗，获得其叶盘或剪成小块，置于M1培养基中进行暗培养，获得预培养叶片；农杆菌活化：取根癌农杆菌阳性单克隆于含抗生素的YEB液体培养基中，黑暗条件下振荡培养，获得菌液；取获得的菌液离心收菌，获得菌体沉淀；将获得的菌体沉淀重悬于M2培养基中，振荡培养，获得用于侵染的菌液；侵染：将获得的所述预培养叶片置于所述用于侵染的菌液中，进行侵染处理；共培养：吸干经侵染处理后的叶片表面的菌液，置于M3培养基中，进行暗培养；延迟筛选：用M4洗涤液洗涤经共培养结束后的叶片，并吸干其表面的菌液，再接种于M5培养基上，进行暗培养；筛选：将延迟筛选结束后的叶片转移至M6培养基中，光照和黑暗交替培养，培养结束后，切除坏死组织，将俞伤组织部分转接于M7培养基中，再光照和黑暗交替培养，直到分化出不定芽；生根：待芽长长后，将其切下转移至M8培养基中再培养，得到完整植株。