[发明专利]一种RNA高通量测序文库的构建方法在审
| 申请号： | 201710029646.6 | 申请日： | 2017-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN108315824A | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 刘月星;李辉辉 | 申请（专利权）人： | 刘月星;李辉辉 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 200090 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供一种能够对所有不带poly(A)尾的RNA进行高通量测序文库构建的方法，本发明方法覆盖所有不带poly(A)尾的RNA，包括线性RNA和环状RNA。线性的不带poly(A)尾的RNA，可以直接利用本发明方法或在打断后进行高通量测序文库构建；环状RNA在打断后，可以利用本发明方法进行高通量测序文库构建。首先，进行末端延伸反应，使上述的RNA在3’末端延伸出一段同聚物序列。然后，进行连接反应后，使其5’端连接上接头R5A。待连接反应后，对上述RNA连接产物进行纯化，再利用特异的逆转录引物RTP进行逆转录反应，获得相应的cDNA一链。最后，利用与高通量测序平台匹配的引物进行PCR扩增，即可得到高通量测序文库。值得一提的是，本发明方法在灵敏度上得到了较大提升，尤其适用于微量样品中低起始量RNA的高通量测序文库的构建。 | ||
| 搜索关键词： | 测序文库 高通量 构建 连接反应 末端延伸 环状RNA 打断 高通量测序 逆转录反应 逆转录引物 连接产物 微量样品 灵敏度 起始量 上接头 同聚物 再利用 引物 匹配 覆盖 | ||
【主权项】：
1.一种RNA高通量测序文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)进行末端延伸反应，使不带poly(A)尾的RNA在3’末端延伸出一段序列；(2)进行连接反应，使上述RNA在其5’端连接上接头R5A，得到RNA连接产物；(3)对上述RNA连接产物进行纯化；(4)利用特异的逆转录引物RTP对上述纯化后的RNA连接产物进行逆转录反应，获得相应的cDNA一链；(5)进行PCR扩增富集，即得到高通量测序文库。
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