[发明专利]从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法，缓冲液作为蛋壳蛋白质提取剂，采用阴、阳离子交换层析柱串联工艺进行富集、分离、纯化，一次性得到三种生物矿化相关的微量功能蛋白。本发明解决了蛋壳蛋白提取、富集困难，效率低等问题，建立了一种简单、快速和高效的共纯化方法，所得三种蛋白质具有高纯度(＞90％)的同时，整个过程耗时短，生产成本低，操作简便，具有广阔的工业化生产潜力，为蛋壳中功能蛋白质的研究应用提供了有利条件。

主权项

一种从蛋壳中共纯化三种微量功能蛋白的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)新鲜的蛋壳清洗干净，烘干后粉碎，得到蛋壳粉，2)将蛋壳粉和水混合并搅拌，收集下层沉淀，烘干后即得脱去蛋壳膜的蛋壳粉；3)向步骤2)所得脱去蛋壳膜的蛋壳粉中加入中性缓冲液提取，搅拌10～30小时，收集上清液并透析，即得蛋壳蛋白粗提液；4)将阴离子交换层析柱、阳离子交换层析柱进行串联，将步骤3)所得的上清液上柱，用平衡液洗脱1～3倍柱体积，使蛋壳蛋白质与离子交换层析柱中的填料结合；5)将串联的阴离子交换层析柱和阳离子交换层析柱拆开，分别进行洗脱并收集洗脱峰；6)将收集到的各洗脱峰进行透析脱盐和冷冻干燥，其中，阳离子交换层析柱的洗脱峰即为Ovocleidin‑17，阴离子交换层析柱的第一个洗脱峰即为Ovocalyxin‑36，第二个洗脱峰即为Ovocleidin‑116。