[发明专利]一种基因定点突变载体及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201710030839.3 | 申请日： | 2017-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN106834341B | 公开（公告）日： | 2020-06-16 |
| 发明（设计）人： | 姜临建;陈其军;倪汉文;许勇;陈易雨;王志平 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/20 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 陈波 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种基因定点突变载体及其构建方法和应用。本发明通过大量的优化，提供一种基因定点突变载体，通过CRISPR系统将胞嘧啶脱氨酶引导至胞嘧啶附近，将胞嘧啶变成尿嘧啶，随后植物细胞内的自发修复最终将尿嘧啶变成了胸腺嘧啶，最终在植物中实现C到T的定点突变，产生抗除草剂抗性。另外还可在非sgRNA靶点区域产生点突变，带来新的抗除草剂的重大农艺性状。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基因 定点 突变 载体 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种基因定点突变载体，其特征在于，所述载体在基础载体的基础上构建，5’到3’包括启动子、sgRNA、胞嘧啶脱氨酶基因、Cas9基因、尿嘧啶DNA糖基化酶抑制剂基因和终止子；所述sgRNA表达区含有植物除草剂所抑制的酶的相关基因的靶点序列；用XTEN将胞嘧啶脱氨酶基因连接在Cas9基因的5’端，尿嘧啶DNA糖基化酶抑制剂基因连接在Cas9基因的3’端，核定位信号序列连接在尿嘧啶DNA糖基化酶抑制剂基因的3’端，进行植物偏好密码子的优化，得到优化的融合基因CT3，序列如SEQ ID No.1所示。
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