[发明专利]一种猪naive胚胎干细胞系的构建方法在审
| 申请号： | 201710030885.3 | 申请日： | 2017-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN108315304A | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 李荣凤;张曼玲;姜海滨;杨宁 | 申请（专利权）人： | 南京医科大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 211123 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种猪naive胚胎干细胞系的构建方法，属于细胞生物学技术领域。本发明将iPSCs技术与传统胚胎干细胞技术相结合首先建立同时表达mOCT4、mSOX2、mKLF4和mc‑MYC的转基因阳性猪胎儿成纤维细胞系；得到转基因阳性的猪囊胚；将囊胚内细胞团接种于细胞饲养层，启动DOX诱导外源转录因子表达，获得猪胚胎干细胞系，待能够稳定传代后，停止表达外源mOCT4、mSOX2、mKLF4和mc‑MYC，干细胞的干性维持由已经激活的内源pOCT4、pSOX2、pKLF4和pc‑MYC来实现，获得猪naive胚胎干细胞。本发明为转基因克隆猪的研究提供可用于基因遗传修饰和长期培养的干细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 胚胎干细胞系 干细胞 转基因 构建 外源 种猪 胎儿成纤维细胞系 胚胎干细胞技术 细胞生物学技术 传代 胚胎干细胞 细胞饲养层 转基因克隆 干细胞系 基因遗传 内细胞团 转录因子 猪囊胚 猪胚胎 干性 可用 囊胚 内源 修饰 接种 诱导 激活 研究 | ||
【主权项】：
1.一种naive胚胎干细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)建立同时表达mOCT4、mSOX2、mKLF4和mc‑MYC的转基因阳性动物胎儿成纤维细胞系；(2)得到转基因阳性的囊胚；(3)将囊胚内细胞团接种于细胞饲养层；(4)诱导外源转录因子表达，获得动物胚胎干细胞系，待能够稳定传代后，停止表达外源mOCT4、mSOX2、mKLF4和mc‑MYC，获得naive胚胎干细胞。
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