[发明专利]生产无岩藻糖单克隆抗体的CHO细胞系建立及其应用

摘要

本发明公开了一种生产无岩藻糖单克隆抗体的CHO细胞系建立及其应用；利用CRISPR/Cas9技术编码CHO细胞的FUT8基因，得到FUT8基因沉默的稳定FUT8基因缺失的CHO细胞株(简称FUT8‑/‑细胞株)。通过对FUT8‑/‑细胞表达的抗体的理化性质及生物活性检测糖型检测结果表明FUT8‑/‑细胞表达的单克隆抗体的岩藻糖完全消除，以野生型CHO细胞表达的含岩藻糖的单克隆抗体为对照，完全无岩藻糖抗体与FcγRIIIa抗原亲和力提高7倍，ADCC效应提高25倍。

主权项

一种生产无岩藻糖单克隆抗体的CHO细胞系的建立方法，其特征在于，所述方法包括：S1、利用CRISPR/Cas9技术，针对CHO‑S细胞FUT8基因的exon9区域设计两对sgRNA；构建FUT8敲除载体pX330‑sgRNA1质粒和pX330‑sgRNA2质粒；S2、将pX330‑sgRNA1质粒和pX330‑sgRNA2质粒利用脂质体转染法共转染进CHO‑S细胞，敲除CHO‑S细胞中的FUT8基因，得到FUT8基因沉默的稳定FUT8‑/‑细胞株。