[发明专利]用于实验鼠蛋白质定量和示踪的N15稳定同位素标记方法

摘要

本发明公开了一种用于实验鼠蛋白质定量和示踪的N15稳定同位素标记方法，首先，利用酵母将N15无机盐转化成生物蛋白，当酵母培养代数达到6代以上，其提取蛋白98％以上都是N15的蛋白，再将酵母磨碎，释放菌体所含蛋白质，经提取纯化制成含N15的菌体蛋白粉末，同时利用N15无机盐培养螺旋藻，当螺旋藻培养代数达到6代以上，藻体中所含N元素98％以上都为N15，再将螺旋藻收获、干燥后得到含N15的螺旋藻干粉，利用含N15的菌体蛋白粉末和含N15的螺旋藻干粉取代常规的N14原料制作成鼠粮，为实验鼠蛋白质标记定量和示踪提供特异性的N15同位素标记。本发明方法可应用于实验鼠的蛋白质定量分析，操作简便，生产成本低，适应性强，利于人们高效、低成本对大量样品进行蛋白质组分析。

主权项

一种用于实验鼠蛋白质定量和示踪的N15稳定同位素标记方法，其特征在于：首先，利用酵母将N15无机盐转化成生物蛋白，当酵母培养代数达到6代以上，其提取蛋白98％以上都是N15的蛋白，再将酵母磨碎，释放菌体所含蛋白质，经提取纯化制成含N15的菌体蛋白粉末，同时利用N15无机盐培养螺旋藻，当螺旋藻培养代数达到6代以上，藻体中所含N元素98％以上都为N15，再将螺旋藻收获、干燥后得到含N15的螺旋藻干粉，利用含N15的菌体蛋白粉末和含N15的螺旋藻干粉取代常规的N14原料制作成鼠粮，为实验鼠蛋白质标记定量和示踪提供特异性的N15同位素标记，其具体包括以下步骤：1)按照以下配方配制只含N15的酵母菌无机培养基：在1升的蒸馏水中，包含以下按质量百分比计的组分：使用高压灭菌锅，将步骤1)中的培养基在120摄氏度下灭菌20分钟；2)按照以下配方配制只含N15的螺旋藻无机培养基：在1升的蒸馏水中，包含以下按质量百分比计的组分：使用高压灭菌锅，将步骤2)中的培养基在120摄氏度下灭菌20分钟；3)待步骤1)和2)中的培养基冷却至室温后，挑取单菌落酵母菌接种在酵母菌无机培养基中培养；选取所需藻种，接种在螺旋藻无机培养基中，调节温度和光照，通入空气并放在匀速振荡器上培养，达到均匀的效果；4)待酵母菌培养代数达到6代以上，取出培养基并离心，用灭菌后的生理盐水清洗，得到酵母菌体；6)收集到的菌体称重后，与氯化钠溶液以1:1～1.5的比例混合成新的菌液，放置于50～60℃环境下，定时震荡，令酵母菌自溶释放蛋白质；7)自溶后，用巴氏灭菌法令菌液中的酶失活，离心后收集液体；8)将步骤7)中的液体冷冻干燥后，得到含N15的菌体蛋白粉末；9)待螺旋藻培养代数达到6代以上，取出培养基并过滤，收集藻体；10)用无菌水反复冲刷清洗藻体降低盐分，清洗后的藻体均匀平铺在广口敞开的容器中，放入冰箱冷冻；11)将预冻好的螺旋藻放入热风干燥箱中干燥，得到含N15的螺旋藻干粉；12)N15实验鼠饲料的配制：将步骤8)中制成的菌体蛋白粉末和步骤11)中制成的螺旋藻干粉作为饲料的基本氮源和主要碳源，取代常规的N14原料用于培养，再加入不含N元素的其他原料，制成最终的N15实验鼠饲料。