[发明专利]镰刀菌病病原菌RT-PCR检测引物和探针组合及试剂盒有效

专利信息
申请号: 201710061639.4 申请日: 2017-01-26
公开(公告)号: CN106868114B 公开(公告)日: 2020-01-07
发明(设计)人: 龚杰;张雯;吴伟伟;陈见友;陆捷洁;韩娜;张婷婷;黎青山 申请(专利权)人: 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所
主分类号: C12Q1/6851 分类号: C12Q1/6851;C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/77
代理公司: 11002 北京路浩知识产权代理有限公司 代理人: 王文君
地址: 102206 *** 国省代码: 北京;11
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摘要: 发明提供一种镰刀菌病病原菌实时荧光定量PCR检测引物和探针组合及试剂盒。所述引物和探针组合的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1‑12所示。本发明的试剂盒能够快速、特异、灵敏、稳定对角膜镰刀菌病病原菌进行分子诊断。在建立了可靠的镰刀菌病病原菌检测体系的基础上,本发明针对性地设计了竞争性内参,确保阴性结果的真实可信。同时,本发明提供的试剂盒包含改良的DNA提取体系,能快速有效地完成DNA提取过程,使检测更为快捷方便。
搜索关键词: 镰刀 病原菌 rt pcr 检测 引物 探针 组合 试剂盒
【主权项】:
1.含有镰刀菌病病原菌RT-PCR检测引物和探针组合的用于实时荧光定量PCR检测镰刀菌病病原菌的试剂盒,其特征在于,所述镰刀菌病病原菌RT-PCR检测引物和探针组合包括:/n(I)用于检测镰刀菌的通用引物和探针,所述镰刀菌包括茄病镰刀菌、串珠镰刀菌和尖孢镰刀菌/nFpan-F:5′-GCCCGAGTTGTAATTTGTAGAG-3′/nFpan-R:5′-AACCAGACGGGGCTCTCAC-3′/nFpan-P:5′-FAM-GGTGCCTTCCGAGTTCCCTGG-BHQ1-3′/n(II)用于检测串珠镰刀菌的特异性引物和探针/nFmon-F:5′-CGCATGAGTGTTTACTTCAACG-3′/nFmon-R:5′-AGGTCGACGAGGACGGCT-3′/nFmon-P:5′-FAM-AGCAGTCAA[T]G[T]CAAGAGTTCA-BHQ1-3′;/n其中,[T]表示锁核酸;/n(III)用于检测茄病镰刀菌的特异性引物和探针/nFsol-F:5′-GCATGAGCGTCTACTTCAAC-3′/nFsol-R:5′-AAGGGACCAGCACGAACG-3′/nFsol-P:5′-FAM-AGCTGACATCTGTAGGCTTCTGGTAA-BHQ1-3′;以及/n(IV)用于检测尖孢镰刀菌的特异性引物和探针/nFoxy-F:5′-TGTCTACTTCAACGAGGTATGC-3′/nFoxy-R:5′-CATGGTACCAGGCTCAAGAT-3′/nFoxy-P:5′-FAM-AATTCCCAAGCTCACACAACTAGG-BHQ1-3′;/n所述试剂盒还包括竞争性内参模板Fpan-IAC、Fmon-IAC、Fsol-IAC、Foxy-IAC和内参探针Fu-IACP,其序列信息如下:/nFpan-IAC:5′-GCCCGAGTTGTAATTTGTAGAGCTAGATGACTGAGCACGTCTATCCGATGATCATGGTGAGAGCCCCGTCTGGTT-3′/nFmon-IAC:5′-CGCATGAGTGTTTACTTCAACGCTAGATGACTGAGCACGTCTATCCGATGATCATGAGCCGTCCTCGTCGACCT-3′/nFsol-IAC:5′-GCATGAGCGTCTACTTCAACCTAGATGACTGAGCACGTCTATCCGATGATCATGCGTTCGTGCTGGTCCCTT-3′/nFoxy-IAC:5′-TGTCTACTTCAACGAGGTATGCCTAGATGACTGAGCACGTCTATCCGATGATCATGATCTTGAGCCTGGTACCATG-3′/nFu-IACP:5′-TAMRA-ACTGAGCACGTCTATCCGA-BHQ1-3′;/n所述试剂盒还包括真菌DNA提取液和/或玻璃珠;/n所述真菌DNA提取液的配方如下:/n
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