[发明专利]一种5`端磷酸化单链DNA的制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201710067173.9 | 申请日： | 2017-02-06 |
| 公开（公告）号： | CN108396043A | 公开（公告）日： | 2018-08-14 |
| 发明（设计）人： | 樊春海;王丽华;李江;诸兵 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海应用物理研究所 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34;C12N15/113;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 薛琦;朱水平 |
| 地址： | 201800 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种5'端磷酸化单链DNA的制备方法及其应用。该制备方法包括如下步骤：(1)在目的DNA两端插入限制性内切酶的酶切位点序列，形成茎环结构前体；(2)将步骤(1)获得的茎环结构前体溶解于缓冲液中并进行退火处理，获得茎环结构溶液；(3)将步骤(2)获得的茎环结构溶液加入限制性内切酶处理，处理后使限制性内切酶失活，得酶切产物；(4)将步骤(3)所得酶切产物回收，即得。本发明制备方法步骤简单、成本低廉，磷酸化效率高，所得5'端磷酸化单链DNA易于表征和纯化，将其应用于基因编辑、靶向定位和/或调控可以显著提高效率，具有广阔的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 茎环结构 磷酸化 限制性内切酶 单链DNA 制备 酶切产物 应用 前体 酶切位点序列 制备方法步骤 靶向定位 退火处理 缓冲液 失活 溶解 回收 基因 调控 | ||
【主权项】：
1.一种5'端磷酸化单链DNA的制备方法，其包括如下步骤：(1)在目的DNA两端插入限制性内切酶的酶切位点序列，形成茎环结构前体，其中所述目的DNA位于茎环结构前体的环状单链区域，所述酶切位点序列位于茎环结构前体的茎部双链区域；(2)将步骤(1)获得的茎环结构前体溶解于缓冲液中并进行退火处理，获得茎环结构溶液；(3)将步骤(2)获得的茎环结构溶液加入限制性内切酶处理，处理后使限制性内切酶失活，得酶切产物；(4)将步骤(3)所得酶切产物回收，即得。
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