[发明专利]一种单克隆抗体的筛选方法及其应用在审
| 申请号： | 201710085557.3 | 申请日： | 2017-02-17 |
| 公开（公告）号： | CN108456682A | 公开（公告）日： | 2018-08-28 |
| 发明（设计）人： | 孙颖;陈维之;孙中平 | 申请（专利权）人： | 苏州金唯智生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/13 | 分类号： | C12N15/13;C12N15/63;C07K16/00 |
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| 地址： | 215123 江苏省苏州市工*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种与目的抗原具有高亲和力的单克隆抗体的筛选方法，包括：（1）混合筛选，m条抗体重链表达载体和n条抗体轻链表达载体混合进行体外抗体表达，ELISA鉴定得到阳性组合；（2）拆分筛选，若（1）得到的阳性组合中重链和轻链的数目均大于1，先按照1条重链与多条轻链和/或1条轻链与多条重链的原则配对，进行体外抗体表达，利用ELISA鉴定得到阳性组合；（3）将阳性组合中的重链和轻链进行拆分，按照1条重链与1条轻链的原则配对，进行体外抗体表达，ELISA检测呈阳性的配对组合即为能产生功能性的单克隆抗体的重/轻链组合。本发明的筛选方法简单高效、切实可行，筛选获得的单克隆抗体具有特异性和较高的亲和性。 | ||
| 搜索关键词： | 轻链 重链 单克隆抗体 筛选 体外抗体 配对 表达载体 高亲和力 抗体轻链 抗体重链 亲和性 抗原 应用 | ||
【主权项】：
1.一种与目的抗原具有高亲和力的单克隆抗体的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）构建抗体文库，并对该抗体文库进行高通量测序；（2）获取针对目的抗原的抗体可变区基因谱；（3）从抗体可变区基因谱中选取CDR3序列及对应的重链和轻链抗体核酸序列作为候选配对序列；（4）分别构建重链和轻链表达载体，混合配对后利用合适的细胞转染技术和表达系统进行抗体表达，对表达产物进行活性检测，得到阳性组合；（5）将阳性组合中的重链和轻链进行拆分，按照1条重链与1条轻链的原则配对，利用合适的细胞转染技术和表达系统进行抗体表达，对表达产物进行活性检测，得到的阳性组合即为与目的抗原具有高亲和力的单克隆抗体。
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