[发明专利]人KRAS基因多点突变单管联检荧光PCR方法、试剂盒及体系

摘要

本发明公开了一种人KRAS基因多点突变单管联检荧光PCR方法、试剂盒及体系。方法包括：在荧光PCR体系中，以含有人KRAS基因突变位点的DNA作为模板进行荧光PCR反应，其中荧光PCR体系中包括：用于检测KRASGly12Asp突变位点的上游引物序列、用于检测KRAS各种突变位点的下游引物序列、用于检测KRAS各种突变位点的荧光探针序列；Taq酶、UNG酶、dNTPs、dUTP、Mg²⁺和PCR缓冲液；第一添加剂和第二添加剂，第一添加剂包括牛血清白蛋白，第二添加剂包括二甲基亚砜、NH₄Cl和山梨糖醇水溶液。本发明能够在单管PCR反应中联合检测KRAS基因第12位和第13位密码子上的7种热点突变。

主权项

1.一种非诊断目的的人KRAS基因多点突变单管联检荧光PCR方法，其特征在于，包括：在荧光PCR体系中，以含有人KRAS基因突变位点的DNA作为模板进行荧光PCR反应，其中所述荧光PCR体系中包括：（a）用于检测KRAS Gly12Asp突变位点的上游引物序列：GAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCdIGA（SEQ ID NO：1），用于检测KRAS Gly12Ala突变位点的上游引物序列：GGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCdIGC（SEQ ID NO：2），用于检测KRAS Gly12Val和Gly12Ser突变位点的上游引物序列：GAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCdIGT（SEQ ID NO：3），用于检测KRAS Gly12Arg和Gly12Cys突变位点的上游引物序列：GGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGdITC（SEQ ID NO：4），用于检测KRAS Gly13Asp突变位点的上游引物序列：GGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTGGdIGT（SEQ ID NO：5），其中，所述上游引物序列中的dI表示脱氧次黄嘌呤核苷酸；（b）用于检测KRAS各种突变位点的下游引物序列：CCTCTATTGTTGGATCATATTCGT（SEQ ID NO：6）；（c）用于检测KRAS各种突变位点的荧光探针序列：GAGTGCCTTGACGATACAGCTAATTC（SEQ ID NO：7），其中，所述荧光探针序列的5’端具有荧光基团，3’端具有淬灭基团；（d）Taq酶、UNG酶、dNTPs、dUTP、Mg²⁺和PCR缓冲液；（e）第一添加剂和第二添加剂，所述第一添加剂包括牛血清白蛋白，所述第二添加剂包括二甲基亚砜、NH₄Cl和山梨糖醇水溶液。