[发明专利]ctDNA超低频突变检测文库的构建方法、试剂盒及文库检测数据的分析方法

摘要

本发明公开了一种ctDNA超低频突变检测文库的构建方法、试剂盒及文库检测数据的分析方法。其中，该构建方法包括以下步骤S1，从全血中提取cfDNA；S2，对cfDNA进行末端修复及3’端添加A碱基；S3，将S2得到的cfDNA的末端连接含有随机标签序列的接头；S4，根据接头的序列及目标区域设计多重PCR的引物进行目标区域捕获；S5，对S4的PCR产物进行磁珠纯化，去除掉未非特异性扩增的小片段DNA及引物二聚体；以及S6，对S5的产物进行PCR扩增，同时引入index序列，得到ctDNA超低频突变的文库。应用本发明排除掉PCR错误及测序错误，提高检测的特异度。

主权项

一种ctDNA超低频突变检测文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，从全血中提取cfDNA；S2，对所述cfDNA进行末端修复及3’端添加A碱基；S3，将所述S2得到的cfDNA的末端连接含有随机标签序列的接头；S4，根据所述接头的序列及目标区域设计多重PCR的引物进行目标区域捕获，所述多重PCR的引物中上游引物为通用引物，匹配所述接头的序列，下游引物为扩增所述目标区域的特异性引物；S5，对所述S4的PCR产物进行磁珠纯化，去除掉未非特异性扩增的小片段DNA及引物二聚体；以及S6，对所述S5的产物进行PCR扩增，同时引入index序列，得到所述ctDNA超低频突变的文库。