[发明专利]苋属的实时荧光PCR鉴定方法有效
| 申请号： | 201710098669.2 | 申请日： | 2017-02-23 |
| 公开（公告）号： | CN106801102B | 公开（公告）日： | 2020-11-20 |
| 发明（设计）人： | 林晓佳;吴姗;陈吴健;虞惠贞;任琰 | 申请（专利权）人： | 浙江省检验检疫科学技术研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 上海智力专利商标事务所(普通合伙) 31105 | 代理人： | 周涛 |
| 地址： | 310012 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种苋属的实时荧光PCR鉴定方法，该鉴定方法包括以下步骤：步骤1，取样本2g，液氮研磨至粉末状，取0.2g研磨后的粉末状样品用试剂盒提取DNA，将提取到的DNA溶解在50μL去离子水中，将得到的DNA样品置于‑20℃冰箱保存、备用；步骤2，基于叶绿体的PsbA基因，设计选取具有苋属特异性的引物和探针，步骤3，TaqMan实时荧光PCR：将步骤2设计选取的引物和探针对步骤1中的DNA样品进行荧光PCR扩增反应，通过荧光PCR扩增后得到Ct值，通过Ct值对样品是否含有苋属进行判定。本发明利用分子生物学手段，通过检测物种DNA序列中特异性的片段，有效解决了形态学鉴定的不足。 | ||
| 搜索关键词： | 实时 荧光 pcr 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
一种苋属的实时荧光PCR鉴定方法，其特征在于，该鉴定方法包括以下步骤：步骤1，苋属DNA提取：取样本2g，液氮研磨至粉末状，取0.2g研磨后的粉末状样品用试剂盒提取DNA，将提取到的DNA溶解在50μL去离子水中，将得到的DNA样品置于‑20℃冰箱保存、备用；步骤2，特异性引物和探针的设计：基于叶绿体的PsbA基因，设计选取具有苋属特异性的引物和探针，所述特异性引物和探针分别为：F：AGGAGCAATGCCGTTTTCTT，R：CAGTATTCAGAACTTGCCTTTGA，P：FAM‑TGTCAAGAAATTGGTTATTGCTCC‑Eclipse，步骤3，TaqMan实时荧光PCR：将步骤2设计选取的引物和探针对步骤1中的DNA样品进行荧光PCR扩增反应，通过荧光PCR扩增后得到Ct值，通过Ct值对样品是否含有苋属进行判定。
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