[发明专利]一种伪狂犬病毒JS-2012株感染性克隆质粒、构建方法与应用

摘要

本发明提供一种伪狂犬病毒JS‑2012株感染性克隆质粒、构建方法与应用，以我国新出现的PRV变异株JS‑2012株为基础，利用loxp‑Cre酶系统，在JS‑2012株gG基因终止密码子下游插入pBeloBAC11载体序列，建立了JS‑2012株感染性克隆质粒，并利用galk正反筛选系统对其进行遗传序列操作，建立了变异株JS‑2012株反向遗传操作系统，为深入研究PRV变异株的遗传变异机制、毒力增强、病毒潜伏感染机制及疫苗开发等提供技术平台。

主权项

一种伪狂犬病毒感染性克隆的构建方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：1)通过同源重组方法，在伪狂犬病毒gG基因ORF终止密码子下游插入两翼含有loxp的EGFP表达框，获得重组病毒rJS2012‑gG/EGFP；利用Cre酶及loxp位点，删除EGFP表达框，获得gG基因ORF终止密码子下游插入loxp的重组病毒rJS2012‑gG/loxp；2)利用Cre‑loxp，将在BamHI‑HindIII酶切位点间插入EGFP表达框的pBeloBAC11载体重组入rJS2012‑gG/loxp中，获得重组病毒rJS2012‑BAC，该重组病毒中，pBeloBAC11载体序列位于gG基因下游；3)将rJS2012‑BAC感染细胞过程中的基因组DNA电转化DH10B细菌，环状病毒基因含有pBeloBAC11，可在细菌中增殖，通过筛选，获得病毒基因组克隆化的质粒pBAC‑JS2012。