[发明专利]高纯度液体剂型葡萄糖异构酶的生产方法有效
| 申请号： | 201710121163.9 | 申请日： | 2017-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN106867986B | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 褚伟立;朱国萍;荣东;刘博;蒋栋梁;王鹏;沈小鹏;曹正宇;宋平;扈建斌 | 申请（专利权）人： | 安徽新熙盟生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/92 | 分类号： | C12N9/92;C12P19/24;C12P19/02;C12R1/465 |
| 代理公司： | 11471 北京细软智谷知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 王金宝 |
| 地址： | 234000 安徽省*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种高纯度液体剂型葡萄糖异构酶的生产方法，包括以下步骤：活化接种、连续培养、发酵培养和处理发酵液，最终得到含有葡萄糖异构酶的液体制剂，具有活力高、耐温、酶活稳定性好的优点，应用于果葡糖浆行业，适合间歇生产F42型果葡糖浆，同时也可使用该葡萄糖异构酶一步法生产F55型果葡糖浆。生产F42型果葡糖浆时该产品对葡萄糖浆质量标准要求较低；一次购酶花费少；操作简单，随加随生产，不需维护和考虑酶活，完全实现该酶国产且生产灵活性高。 | ||
| 搜索关键词： | 纯度 液体 剂型 葡萄糖 异构酶 生产 方法 | ||
【主权项】：
1.高纯度液体剂型葡萄糖异构酶的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：/nA、活化接种：将链霉菌活化后，接入培养瓶中培养，得到种母液；/nB、连续培养：将种母液依次在180-220转/分，30-35℃下培养24-28小时，在180-220转/分，30-35℃下培养18-36小时，在150-180转/分，30-35℃下培养18-36小时，得到培养液；/nC、发酵培养：将培养液在110-150转/分，30-35℃下培养40-55小时，得到发酵液；/nD、处理发酵液：将发酵液经过过滤处理后取滤液，得到含有葡萄糖异构酶的液体制剂；/n所述链霉菌为M1033链霉菌；/n步骤A中，从零下80-零下85℃的冻干管中取出链霉菌，在30-35℃下斜面活化48-72小时后，接入培养瓶中培养；所述培养瓶为摇瓶；步骤B中，将种母液依次在180-220转/分，30-35℃下在摇瓶中培养24-28小时，然后在180-220转/分，30-35℃下在一级种子罐中培养18-36小时，在150-180转/分，30-35℃下在二级种子罐中培养18-36小时，得到培养液；步骤C中，在发酵罐中进行发酵培养；连续培养和发酵培养均在无菌环境中进行；/n步骤D中的过滤处理为：向发酵液中添加防腐剂、硅藻土、膨润土和纯净水，在15-30℃下搅拌15-30分钟后，静置1-3小时，再依次进行过滤除渣、微滤除菌和超滤浓缩；所述硅藻土、膨润土和纯净水相对发酵液的重量百分比分别为1-3％、1-5％和50-150％；板框过滤、微滤和超滤的过滤压力分别为0.05-0.25MPa，0.15-0.35MPa和0.30-0.50MPa；/n步骤D中，超滤浓缩处理后，还有防腐稳定处理：向浓缩液中加入食盐、醋酸钠、甘油、硫酸镁和氯化钴，食盐、醋酸钠、甘油、硫酸镁和氯化钴相对最终液体制剂的体积百分比分别为15-20％，5-10％，2-5％，0.1-0.2％和0.05-0.1％；经过防腐稳定处理后，还需经过检验步骤，检验合格后，灌装入库；检验的标准为：含有葡萄糖异构酶的液体制剂的酶活大于等于5000u/ml。/n
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