[发明专利]一种利用全内反射荧光显微镜检测单个生物标识物的方法

摘要

本发明公开了一种利用全内反射荧光显微镜检测生物标识物的方法。该方法利用生物素‑亲和素连接以及抗原抗体反应或核酸分子与探针的反应，依靠全内反射的荧光激发方式激发固定在载体表面100nm范围内的荧光标记的检测分子，通过荧光显微镜采集到荧光分子信号，可以得到待检测生物标识物数目。由于游离于溶液中的荧光分子不被激发，所以采集到的荧光信号背景噪音比较低，具有非常高的信噪比，可以分辨出单个分子的荧光信号，从而该方法具有高检测灵敏性。此检测方法可以用于检测各种生物标识物，对于疾病中病原的发现和疾病的防治具有重大意义。

主权项

一种固定生物标识物的方法,其特征在于：包括如下步骤：(1)将载体的表面先用生物素化PEG修饰；(2)向所述的载体上加入亲和素，生物素与亲和素之间会发生连接；(3)再向所述的载体上加入生物素标记的连接物1，生物素与亲和素之间发生连接，所述的连接物1被固定到所述的载体上；(4)再加入连接物2，与所述的连接物1结合；(5)加入生物标识物，生物标识物会与所述的连接物2发生连接，所述的连接物2作为诱饵捕获生物标识物；(6)再加入与生物标识物反应的连接物3，最后加入荧光标记的检测分子与所述的连接物3连接，依靠生物标识物与连接物间特异性反应将生物标识物固定在所述在载体上，形成一种“夹心”的单个生物标识物检测模式。