[发明专利]一种利用高通量测序技术快速获得纳米抗体的方法在审
| 申请号： | 201710124496.7 | 申请日： | 2017-03-03 |
| 公开（公告）号： | CN106866821A | 公开（公告）日： | 2017-06-20 |
| 发明（设计）人： | 李福胜;庄文超;李洪利;覃海兰 | 申请（专利权）人： | 康众（北京）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C12N15/70;C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京市商泰律师事务所11255 | 代理人： | 毛燕生 |
| 地址： | 101111 北京市大兴区北京经济*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种利用高通量测序技术快速获得纳米抗体的方法，所述方法将流式细胞分选技术和高通量测序技术进行结合，其包括的步骤为获得特定蛋白质W免疫和未免疫的羊驼外周血单个核细胞(PBMC)；采用流式细胞分选法获得针对特定蛋白质W特异的PBMC；提取未免疫、免疫后及分选后PBMC的总RNA，并反转录成cDNA；以所述的cDNA为模板，通过两步法PCR扩增获得抗特定蛋白质W的纳米抗体的DNA片段；构建纳米抗体的DNA片段的DNA文库，并进行高通量测序分析；分析所述纳米抗体的DNA片段的丰度；和将所述纳米抗体DNA片段的核苷酸序列构建入表达载体，并使所述纳米抗体DNA片段在合适的宿主中表达。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 通量 技术 快速 获得 纳米 抗体 方法 | ||
【主权项】：
一种利用高通量测序技术快速获得纳米抗体的方法，其包括的步骤为：A)获得特定蛋白质W免疫和未免疫的动物外周血单个核细胞(PBMC)，其中蛋白质W为任意蛋白；B)采用流式细胞分选法获得针对所述特定蛋白质W特异的PBMC；C)提取步骤A)中所述特定蛋白质W免疫的PBMC、未免疫的PBMC和步骤B)流式细胞分选的PBMC的总RNA，并反转录成cDNA；D)以步骤C)中所述的cDNA为模板，通过两步法PCR扩增获得抗特定蛋白W的纳米抗体的DNA片段；E)将步骤D)中PCR扩增获得所述纳米抗体的DNA片段的产物构建成DNA文库，并进行高通量测序分析；F)采用生物信息学方法及分析软件分析所述纳米抗体的DNA片段的丰度，纳米抗体的体细胞超突变和纳米抗体进化的谱系，并获得纳米抗体DNA片段的核苷酸序列；和G)将步骤F)中所述纳米抗体DNA片段的核苷酸序列构建入表达载体，并使所述纳米抗体DNA片段在合适的宿主中表达。
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