[发明专利]一种快速分析微生物多态性动态变化的微型荧光凝胶电泳方法在审
申请号: | 201710139282.7 | 申请日: | 2017-03-09 |
公开(公告)号: | CN106868151A | 公开(公告)日: | 2017-06-20 |
发明(设计)人: | 刘建华;何靖;程涛;梁冀北;胡兴翠 | 申请(专利权)人: | 浙江大学舟山海洋研究中心 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 杭州杭诚专利事务所有限公司33109 | 代理人: | 尉伟敏,赵越剑 |
地址: | 316021 浙江省舟*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | 本发明公开了一种快速分析微生物多态性动态变化的微型荧光凝胶电泳方法,包括如下步骤(1)用引物PCR扩增微生物16S rDNA,并将PCR产物进行测序,通过与NCBI数据库进行序列比对确定菌种;(2)利用Hha Ⅰ限制性内切酶切割PCR产物;(3)利用微型垂直PAGE凝胶电泳分离各个微生物物种的荧光标记片段,最后通过荧光成像系统观察凝胶,根据片段大小、荧光强弱,确定各微生物物种的动态变化。本发明简单易行,成本低,高效快速,重复性好,应用性广,可广泛应用于原核生物的研究。 | ||
搜索关键词: | 一种 快速 分析 微生物 多态性 动态 变化 微型 荧光 凝胶电泳 方法 | ||
【主权项】:
一种快速分析微生物多态性动态变化的微型荧光凝胶电泳方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)用引物PCR扩增微生物16S rDNA,引物为27F和1492R,其中27F的5’端有FAM荧光标记,并将PCR产物进行测序,通过与NCBI数据库进行序列比对确定菌种;(2)利用Hha Ⅰ限制性内切酶切割PCR产物,会产生多条大小不一的片段,每条16S rDNA只有最左端限制性酶切片段具有荧光标记,其它片段没有荧光标记;(3)利用微型垂直PAGE凝胶电泳分离各个微生物物种的荧光标记片段,最后通过荧光成像系统观察凝胶,根据片段大小、荧光强弱,确定各微生物物种的动态变化。
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