[发明专利]一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法

摘要

本发明公开了生物医药技术领域的一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法，该博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法的具体步骤如下S1单孢子溶液制备；S2耐性菌株培育；S3耐性菌株摇瓶发酵；S4选取抑菌圈较大的菌株进行复筛；S5发酵培养种子液制备；S6摇床培养种子液；S7真空干燥，本发明提高了博来霉素的生产周期，进一步的提高其产量，并简化了发酵培养基的成分，降低了生产成本，且制备出的博来霉素能够展现出更好的活性和更低的毒性。

主权项

一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法，其特征在于：该博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法的具体步骤如下：S1：在轮枝链霉菌菌种的新鲜斜面加入10ml无菌水，刮下白色孢子层后，所得的悬浮液经过滤后振荡2min，制得单孢子溶液；S2：利用滴定管吸取10ml单孢子溶液于无菌平板中，采用紫外线照射后，将其均匀涂布于无菌平板中培养，制备出耐性菌株；S3：将耐性菌株接种至含有发酵培养基的三角瓶中，摇瓶发酵；S4：将发酵后产生的发酵液经过过滤后用微量注射器各取上清液15μL，并滴于圆形层析滤纸小片上，且纸片贴在鉴定菌的培养板上，在37℃环境下培养14～20h，并取抑菌圈较大者进行复筛；S5：利用HPLC色谱分析方法选取目标产物生产能力较高的菌株，并转接于发酵培养基中，装液量为50mL的三角瓶，在30℃、170r·min‑1的条件下摇床培养60～70h，得到作为发酵培养的种子液；S6：以10％接种量将所得种子液接种到发酵培养基中进行摇床培养，发酵体系为300mL三角瓶装液量为50mL，在30℃、200r·min‑1的条件下摇床培养6d；S7：发酵结束后，收集发酵液，用10倍体积甲醇振荡浸提24h后，将甲醇浸提液放入真空干燥箱中烘干后既得。