[发明专利]一种提取野生蔷薇内生真菌基因组的方法

摘要

本发明公开了一种提取野生蔷薇内生真菌基因组的方法。所述方法将野生蔷薇表面消毒、液氮研磨处理后，采用CTAB混合液结合土壤微生物DNA强力提取试剂盒提取内生真菌基因组DNA。本发明针对野生蔷薇样品的特殊性进行设计，避免野生蔷薇植物中所含醌类物质、酚类物质、多酚氧化酶及破壁不充分等因素对基因组DNA提取效率的不良影响。此方法可以运用于所有野生蔷薇内生菌基因组的提取，具有应用范围广、提率高的特点。本发明提供的方法应用于野生蔷薇大理紫花内生真菌基因组和野生蔷薇七姐妹内生真菌基因组的提取，都达到良好的提取效果，提取的基因组DNA均可用于各类分子学实验。

主权项

1.一种提取野生蔷薇内生真菌基因组的方法，其特征在于，所述方法操作如下：将表面消毒后的野生蔷薇植物组织剪碎，置于预冷研钵中加液氮覆盖，用力充分研磨至细粉末状，称取研磨后的粉末置于预热后的CTAB混合液中，研磨至粘稠状混合物，混合物涡旋混匀后，加入试剂盒中的Solution C1，上下颠倒数次混匀，涡旋振荡、离心后将上清液转移到新的收集管中，加入Solution C2，涡旋混匀，孵育、离心；转移上清液 到新的收集管中，加入Solution C3，涡旋混匀，孵育，离心；转移上清到新的收集管中，加入Solution C4，涡旋混匀后放入旋转过滤器中，离心弃去滤液，继续加载上清，室温、离心，重复直至过滤完所有上清；加入Solution C5到旋转过滤器中，室温离心，弃去上清后，转移旋转过滤器到收集管中，然后加入Solution C6到白色滤膜中心，离心弃去旋转过滤器；得到总DNA样品，放置‑20℃的冰箱中保存，备用；所述CTAB混合液中CTAB的质量百分比为1.8～2.2％、β‑巯基乙醇的浓度为1.8～2.2％(v/v)和PVP的浓度为9～11％(m/v)。