[发明专利]一种检测ST‑II型产肠毒素大肠杆菌的LAMP试剂盒及使用方法

摘要

本发明公开了一种ST‑Ⅱ（heat‑stable enterotoxin typeⅡ，ST‑Ⅱ，耐热肠毒素Ⅱ型）型产肠毒素大肠杆菌的LAMP检测试剂盒及使用方法，属于病原微生物检测技术领域。该试剂盒包含4条引物，所述引物由正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP和反向内引物BIP组成。利用本发明的试剂盒在60℃～63℃恒温水浴反应45min，便可高效特异地检出ST‑II型产肠毒素大肠杆菌。本试剂盒灵敏度达到500fg/μL，其敏感性为常规PCR的1000倍，具有特异性强、灵敏度高、操作简单，判定简单且成本低廉等优点，能较好的满足ST‑II型产肠毒素大肠杆菌的现场检测，为养殖场疫病的现场检测提供了新的平台。

主权项

一种ST‑II型产肠毒素大肠杆菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，包含以下组分：（1）反应液I（23μL）：10×Thermopol buffer 2.5μL；2.5mM dNTP mix 1～6μL；25mM MgCl2 0～3μL；8U/uL Bst DNA 酶 0.2～1.2μL；10μM正向外引物F3 0.2～0.7μL；10μM反向外引物B3 0.2～0.7μL；10μM正向内引物FIP 2～5μL；10μM反向内引物BIP 2～5μL、其余为灭菌超纯水；所述正向外引物F3序列为：5’‑ GCAATAAGGTTGAGGTGATT ‑3’；所述反向外引物B3序列为：5’‑ GCAACCATTATTTGGGCG ‑3’；所述正向内引物FIP序列为：5’‑ TGATTGTGTAGATGCATAGGCATTATTTCTTCTTGCATCTATGTTCG ‑3；所述反向内引物BIP序列为：5’‑ TAGACAAATAGCCAAGGAAAGTTGTTGCTCCAGCAGTACCATC ‑3（2）阳性DNA（2μL）：待测样品DNA；（3）显色液（1μL）：SYBR Green I。