[发明专利]一种具生物活性的霍乱毒素B亚基蛋白的制备方法有效
| 申请号： | 201710159479.7 | 申请日： | 2017-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN106946984B | 公开（公告）日： | 2020-06-02 |
| 发明（设计）人： | 刘晓黎;李从刚;裴云山;吴琼;刘买利 | 申请（专利权）人： | 中国科学院武汉物理与数学研究所 |
| 主分类号： | C07K14/28 | 分类号： | C07K14/28;C07K1/34;C12N15/70 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 龚莹莹 |
| 地址： | 430071 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种具生物活性的霍乱毒素B亚基蛋白的制备方法，通过利用原核表达载体，在大肠杆菌中大量表达霍乱毒素亚基，然后在体外进行高效复性，得到大量具有生物活性的霍乱毒素B亚基，普通实验室均可操作，无污染。最重要的优点是，可以根据实验需求，进行各种荧光，同位素，示踪剂标记。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 生物 活性 霍乱 毒素 蛋白 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种具生物活性的霍乱毒素B亚基蛋白的制备方法，包括下述步骤：将纯化的霍乱毒素B亚基蛋白包涵体依次进行下述处理：1）含有4M尿素缓冲液透析12‑24小时；所述的含有4M尿素缓冲液的配方为：20mM Tris, 100mM NaCl, 5% Glycerol, 1% Glycine, 5 mM EDTA, 0.1 mM GSSG, 1 mM GSH, 4M Urea，pH 8.5；2）含有2M尿素缓冲液透析12‑24小时；所述的含有2M尿素缓冲液的配方为：20mM Tris, 100mM NaCl, 5% Glycerol, 1% Glycine, 5 mM EDTA, 0.1 mM GSSG, 1 mM GSH, 2M Urea，PH 8.5；3）含有1M 尿素缓冲液透析12‑24小时；所述的含有1M尿素缓冲液的配方为：20mM Tris, 100mM NaCl, 5% Glycerol, 1% Glycine, 5 mM EDTA, 0.1 mM GSSG, 1 mM GSH, 1M Urea，PH 8.5；4）不含尿素缓冲液透析10‑24小时，并继续透析2‑3遍，即得具备活性的霍乱毒素B亚基蛋白；所述的不含尿素缓冲液的配方为：20mM Tris, 100mM NaCl, PH8.5；以上透析过程中所用透析袋的规格为10KD。
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