[发明专利]一种人血浆中他达拉非的定量分析方法

摘要

本发明公开了一种人血浆中他达拉非的定量分析方法，包括如下步骤：（1）标准工作溶液的配制；（2）样品处理；（3）标准曲线制作；（4）定量分析：将试验样品按照步骤（3）的方法处理，并按步骤（3）所得的标准曲线方程计算，得到试验样品中他达拉非的浓度。本发明应用液质联用技术(HPLC‑MS/MS)测定人血浆中他达拉非的浓度，准确定量人血浆中他达拉非的浓度，通过色谱柱、溶解液、流动相、质谱条件等的合理选择，流速、洗脱方式、质谱条件等工艺条件的优化，操作简便，重复性高，准确性好，可操作性强，可以直接运用于生物等效性中样品检测分析。

主权项

1.一种人血浆中他达拉非的定量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）标准工作溶液的配制：称取他达拉非，加入体积比9:1的甲醇‑二甲亚砜溶液配制成浓度为0.100～5.000 mg•mL‑1的他达拉非储备液，将所述他达拉非储备液用体积比1:1的甲醇水溶液稀释成梯度浓度为40.0～40000 ng•mL‑1的他达拉非工作溶液；按上述步骤重复一次，配置成梯度浓度为40.0~320000 ng•mL‑1的他达拉非平行工作溶液；称取他达拉非‑d3，加入体积比9:1的甲醇‑二甲亚砜溶液配制成浓度为0.050～2.000 mg•mL‑1的内标储备液，用体积比1:1的甲醇水溶液稀释成300～500 ng•mL‑1的内标工作溶液；所有储备液及工作溶液在0~10℃下保存，备用；取空白人正常血浆，分别加入所述他达拉非工作溶液，混匀，配置成相应梯度的校正标样，其浓度范围为2.00~2000 ng•mL‑1；取空白人正常血浆，分别加入所述他达拉非平行工作溶液，混匀，配置成相应梯度的质控样品，其梯度浓度范围为2.00~16000 ng•mL‑1；（2）样品处理：取等体积的校正标样、质控样品、试验样品、空白人血浆和水，往校正标样、质控样品、试验样品中分别加入等体积的所述内标工作溶液，往空白人血浆和水分别加入等体积的甲醇水溶液；向上述每个混合液中加入乙腈，混匀，离心，转移上清液至甲醇水溶液中，混匀，将各提取物保存；（3）标准曲线制作：将步骤（2）得到校正标样、质控样品的提取物进行LC‑MS/MS分析测定，以他达拉非和内标他达拉非的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中他达拉非的浓度为横坐标制作标准曲线；（4）定量分析：将试验样品按照步骤（3）的方法处理，并按步骤（3）所得的标准曲线方程计算，得到试验样品中他达拉非的浓度。