[发明专利]一种人血浆中熊去氧胆酸的定量检测方法在审
| 申请号： | 201710159593.X | 申请日： | 2017-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN106645504A | 公开（公告）日： | 2017-05-10 |
| 发明（设计）人： | 姜宏梁;张杨 | 申请（专利权）人： | 武汉宏韧生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司32224 | 代理人： | 薛海霞 |
| 地址： | 430075 湖北省武汉市东湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人血浆中熊去氧胆酸的定量检测方法，包括步骤(1)标准工作溶液的配制；(2)血浆样品前处理过程；(3)标准及曲线配制过程；(4)LC‑MS/MS测定过程。该方法采用沉淀前处理、LC‑MS/MS质谱仪对人血浆中熊去氧胆酸的含量进行测定，操作简单、分离效果好、定性准确、样品分析时间短、检测灵敏度高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 血浆 中熊去氧 胆酸 定量 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种人血浆中熊去氧胆酸的定量检测方法，包括如下步骤：(1)标准工作溶液的配制：称取熊去氧胆酸对照品至玻璃瓶中，加入甲醇配制成浓度为2～10mg·mL‑1的熊去氧胆酸储备液，将所述熊去氧胆酸储备液用体积比1:1的甲醇水溶液稀释成浓度为0.1～5000μg·mL‑1的熊去氧胆酸工作溶液；称取一定量的内标熊去氧胆酸‑d4至玻璃瓶中，加入甲醇配制成浓度为0.300～0.800mg·mL‑1的内标储备液，用体积比1:1的甲醇水溶液稀释成200～600ng·mL‑1的内标工作溶液；所有储备液及工作溶液在0～10℃下保存，备用；(2)血浆样品前处理过程：取20.0～60.0μL人血浆样品，向样品中加入步骤(1)所述的内标工作溶液，然后加入乙腈沉淀剂，涡旋混合，于3～8℃的离心机中高速离心3～5分钟；取上清液并向上清液中加入体积比1:1的甲醇水溶液，涡旋混合3～5分钟，进行LC‑MS/MS分析；(3)标准及曲线配制过程：等量取步骤(1)所述各浓度熊去氧胆酸工作溶液，分别加入到犬空白血浆中涡旋混匀，配制成校正标样及随行质控样品，然后分别注入LC‑MS/MS中进行测定，以熊去氧胆酸和内标熊去氧胆酸‑d4的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中熊去氧胆酸的浓度为横坐标制作标准曲线；(4)LC‑MS/MS测定过程：根据标准曲线计算人血浆样品中的熊去氧胆酸浓度。
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