[发明专利]辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸浓度的定量分析方法

摘要

本发明公开了一种辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸浓度的定量分析方法，包括如下步骤：（1）标准工作溶液的配制；（2）样品处理；（3）标准曲线制作；（4）定量分析：将试验样品按照步骤（3）的方法处理，并按步骤（3）所得的标准曲线方程计算，得到试验样品中辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸的浓度。本发明应用液质联用技术(HPLC‑MS/MS)同时测定人血浆中辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸的浓度，在血浆样品中加入适量的酸碱来消除辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸基质效应的干扰，并通过色谱柱、溶解液、流动相、质谱条件等的合理选择，流速、洗脱方式，减少了残留，增强了选择性，提高了灵敏度，重复性高，准确性好，可操作性强，可以直接运用于生物等效性中样品检测分析。

主权项

1.一种辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸浓度的定量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）标准工作溶液的配制：取pH4.50、0.0100 mol/L醋酸‑醋酸钠缓冲液；将乙腈与所述醋酸‑醋酸钠缓冲液等体积混合配制成乙腈‑醋酸溶液；称取辛伐他汀，加入乙腈，配制成浓度为0.200～0.300 mg•mL‑1的辛伐他汀储备液，按上述步骤重复一次，获得辛伐他汀平行储备液；称取辛伐他汀羟基酸钠盐，加入体积比为1:1的乙腈‑二甲基亚砜溶液，配置成浓度为0.200～0.300 mg•mL‑1的辛伐他汀羟基酸储备液，按上述步骤重复一次，获得辛伐他汀羟基酸平行储备液；取等体积的辛伐他汀储备液和辛伐他汀羟基酸储备液混合，再用所述乙腈‑醋酸溶液稀释成梯度浓度为2.00～2000 ng•mL‑1的辛伐他汀/辛伐他汀羟基酸工作溶液；取等体积的辛伐他汀平行储备液和辛伐他汀羟基酸平行储备液混合，再用所述乙腈‑醋酸溶液稀释成梯度浓度为2.00～16000 ng•mL‑1的辛伐他汀/辛伐他汀羟基酸平行工作溶液；取辛伐他汀平行储备液用乙腈‑醋酸溶液稀释成梯度浓度为12.0～2000 ng•mL‑1的辛伐他汀工作溶液；取辛伐他汀羟基酸平行储备液用乙腈‑醋酸溶液稀释成梯度浓度为12.0～2000 ng•mL‑1的辛伐他汀羟基酸工作溶液；称取辛伐他汀‑d6，加入乙腈，配制成浓度为0.050~0.150mg•mL‑1的辛伐他汀‑d6内标储备液；称取辛伐他汀羟基酸‑d6，加入体积比为1:1的乙腈‑二甲基亚砜溶液，配置成浓度为0.050～0.150 mg•mL‑1的辛伐他汀羟基酸‑d6内标储备液；将所述辛伐他汀‑d6内标储备液与辛伐他汀羟基酸‑d6内标储备液等体积混匀，再加入所述乙腈‑醋酸溶液，获得内标工作溶液；取空白人正常血浆，分别加入所述辛伐他汀/辛伐他汀羟基酸工作溶液、醋酸‑醋酸钠缓冲液，混匀，配置成相应梯度的校正标样，其梯度浓度范围为0.100~100 ng•mL‑1；取空白人正常血浆，加入所述辛伐他汀/辛伐他汀羟基酸平行工作溶液、醋酸‑醋酸钠缓冲液，混匀，配置成相应梯度的质控样品，其梯度浓度范围为0.100~800 ng•mL‑1；所有储备液及工作溶液在0~10℃下保存，备用；（2）样品处理：空白试剂：将等体积的所述醋酸‑醋酸钠缓冲液与水混合；空白基质：将不少于3个供体的空腹采血混匀，加入等体积的醋酸‑醋酸钠缓冲液，配制成混合空白人正常血浆，将不少于3个供体的餐后采血混匀，加入等体积的醋酸‑醋酸钠缓冲液，配制成混合空白人高脂血浆；将上述混合空白人正常血浆和混合空白人高脂血浆等体积混匀；取等体积的校正标样、质控样品、试验样品、空白基质和空白试剂，往校正标样、质控样品、试验样品中分别加入所述内标工作溶液，往空白基质和空白试剂中分别加入所述乙腈‑醋酸溶液；向上述每个混合液中加入所述醋酸‑醋酸钠缓冲液、甲基叔丁基醚，混匀，离心，转移上清液，氮吹，将各提取物保存；（3）标准曲线制作：将步骤（2）得到校正标样、质控样品的提取物进行LC‑MS/MS分析测定，以辛伐他汀比内标辛伐他汀‑d6、辛伐他汀羟基酸比内标辛伐他汀羟基酸‑d6的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中辛伐他汀、辛伐他汀羟基酸的浓度为横坐标制作标准曲线；（4）定量分析：取试验样品按照步骤（3）的方法处理，并按步骤（3）所得的标准曲线方程计算，得到待测样品中辛伐他汀、辛伐他汀羟基酸的浓度。